Caracterización molecular de recombinantes naturales entre herpesvirus bovino 1 y 5 (BoHV1 y BoHV5)

MAIDANA SS; CRAIG M; MAUROY A; THIRY E; ROMERA SA

Buenos Aires

Congreso; XI Congreso Argentino de Virología, II Congreso Latinoamericano de Virología. IV Simposio Argentino de Virología Clínica, II Simposio Argentino de Virología Veterinaria; 2015

La subfamilia Alfaherpesvirinae agrupa agentes virales de importancia médica y económica tanto en el hombre como en los animales. La gran diversidad en esta subfamilia lleva a considerar a los mecanismos de recombinación como responsables de la diversidad favoreciendo la adquisición de propiedades ?nuevas? en una cepa viral. Uno de los tipos de recombinación es la homóloga que se basa en un alto grado de similitud genética. Aunque también, se reportó recombinación interespecífica en condiciones experimentales, con un bajo nivel de homología como BoHV1 y BoHV5. En Argentina se ha demostrado la co-circulación de algunos de los alfaherpesvirus de rumiantes como el BoHV1/5. Si bien se han obtenido y caracterizado recombinantes in vitro entre estas especies virales aún no se han hallado recombinantes naturales. Nuestro grupo ha reportado la circulación en Argentina de 2 de los tres subtipos de BoHV5, los subtipo ?b? y ?a?, siendo este último el más prevalente. Los 3 aislamientos de subtipo ?b? al ser analizados por filogenia basada en algunos genes, mostraron agrupamientos diferentes, ciertas regiones del genoma se agrupan con BoHV5 y otras con BoHV1, sugiriendo que estos virus podrían ser recombinantes naturales. Surge entonces como objetivo caracterizar molecularmente los virus donde se identificaron zonas genómicas foráneas en un determinado fondo genético y hallar los sitios de recombinación. Para la determinación del background genético se usó la estrategia de amplificación por PCR de fragmentos de genes a lo largo de todo el genoma y secuenciación de los mismos para localizar el o los puntos de recombinación. Los oligonucleótidos fueron diseñados en base a las secuencias disponibles en GenBank. Las secuencias nucleotídicas fueron editadas y analizadas con el BioEdit version 7.0.5.3. Los alineamientos se realizaron Clustal W. MEGA 5.0 software. Y finalmente las secuencias nucleotídicas de los diferentes fragmentos génicos fueron concatenados, alineados y sometidos a los programas RPD4 y Simplot. Se hallaron dos puntos de recombinación en la región única larga dentro del marco de lectura del gen UL27. Un punto de recombinación abarca desde el nt 56578 al 56586 y el otro desde el nt 58848 al 58855 (basándonos en el genoma de BoHV5 NC_005261.2) observándose un fragmento de recombinación de 2273 pb con 100% de identidad con el genoma de BoHV1.2b. El resto del genoma fue analizado amplificando fragmentos de 5 genes de la región UL (UL53, UL44, UL42, UL22 y UL10) y 2 de la US (US8 y US6) resultando en un 100% de identidad nt con el genoma de BoHV5a.Los resultados demuestran que es posible la recombinación homóloga natural entre BoHV1 y BoHV5 observándose en los 3 aislamientos de campo de BoHV5b reportados hasta el momento el mismo evento de recombinación.