Análisis virológico y molecular comparativo de subtipos de BoHV-5

LG SILVA; BS SIEDLER; SS MAIDANA; CD MORANO; FS CAMPOS; PM ROEHE; G FISCHER; AS ROMERA

Buenos Aires

Congreso; X Congreso Argentino de Virología III Simposio Argentino de Virología Clínica I Simposio Argentino de Virología Veterinaria III Encuentro de Virólogos latinoamericanos; 2011

Sociedad Argentina de Virología

El Herpesvirus Bovino Tipo 5 (BoHV-5) es el agente causal de la encefalitis bovina, fue aislado por primera vez en 1962, de un brote de terneros de Australia. Este virus pertenece al orden Herpesvirales, familia Herpesviridae, subfamilia Alphaherpesvirinae, es responsable de brotes esporádicos en América del Sur, principalmente Brasil y Argentina. BoHV-5 de acuerdo con el perfil de restricción enzimática está subdividido en subtipos a, b y non-a, non-b, o c, cuyos perfiles de referencia son la cepa australiana N569, cepa argentina A663 y cepas brasileras (ISO 97/45 e ISO 97/87), respectivamente. Este trabajo tuvo como finalidad caracterizar, virológica y molecularmente, una cepa brasilera de BoHV-5 subtipo c, junto con su posterior análisis comparativo con cepas de subtipo a y b. Para determinar tamaño de placas de lisis y tamaño de placas de infección se infectaron monocapas de células MDBK con 80% de confluencia con el virus y se revelaron con cristal violeta o un anticuerpo anti-herpes marcado con fluoresceína, respectivamente. Para confirmar la identidad viral, se extrajo DNA de la muestra y se realizó una PCR diferencial entre BoHV-1 e 5. Para determinar el perfil de restricción, el DNA obtenido fue digerido con la enzima BstEII, luego sometido a eletroforesis en gel de agarosa 0,7%, y teñido con bromuro de etidio para la visualización de bandas con luz UV, y su posterior caracterización de la cepa a nivel de subtipo. Los resultados de la caracterización genotípica, por Análisis de restricción enzimática, corroboran que la cepa ISO 97/87 pertenece al subtipo ?c?. Respecto de la caracterización a nivel de subtipo mediante PCR diferencial entre subtipo a y b previamente descrita no fue posible con esta técnica diferenciar el subtipo c del a, en futuros trabajos será necesario desarrollar una PCR diferencial entre los 3 subtipos o al menos entre los subtipos a y c. El análisis comparativo a nivel virológico entre los subtipos a, b y c indica que la cepa ISO 97/87 produce focos de lisis e infección mayores que las cepas RP (a) y A663 (b). En futuros trabajos se plantea el estudio comparativo de patogenia desarrollada por los tres subtipos en el hospedador natural y determinar si la mayor eficacia replicativa in vitro se traduce también en una mayor virulencia in vivo.