Monitoreo genético de cepas consanguíneas de ratas: adaptación de la técnica sslp con reactivos locales

FATIMA TORALES; ROCIO TAU; CAROLA FERRECCIO; NATALIA BACHIR; ROMERA SONIA ALEJANDRA; MAIDANA S. S

Congreso; la II reunion Cientifica internacional, VII reunion cientifica regional y VI congresso nacional de ciência y tecnologia de animales de laboratório; 2021

AACyTAL

Las líneas consanguíneas de ratones y ratas fueron creadas y seleccionadas por el hombre para ser utilizadas en experimentos científicos ya que permiten eliminar la variabilidad genética de los ensayos. Aunque las cepas de ratones y ratas se consideran genéticamente estables, las mismas pueden variar a causa de contaminaciones por cruzamiento accidentales con otra cepa y/o por la acumulación progresiva de mutaciones espontáneas. La técnica mayormente utilizada por ser económica y fácil de realizar es SSLP, esta consiste en la amplificación de secuencias cortas repetidas por medio de PCR. La utilización de animales con genética homogénea permite reducir la cantidad de animales de los experimentos, cumpliendo así con el principio de reducción de las 3R, disminuyendo los costos del ensayo por reducción del número de repeticiones realizadas. Actualmente nuestro laboratorio ofrece el servicio de control genético para cepas consanguíneas de ratones de experimentación sin embargo aún no estaba disponible el servicio de control genético para cepas consanguíneas de ratas por lo cual objetivo de este trabajo fue la adaptación (condiciones locales) de la técnica de SSLP recomendadas internacionalmente para determinar la condición genética de las cepas consanguíneas de ratas de experimentación. Se seleccionaron 26 microsatélites para discriminar las cepas de ratas Brown Norway (BN) y una cepa endocriada derivada de Sprague Dowly (SD/RiJ). Las secuencias de los oligonucleótidos que permiten amplificar dichos microsatelites se encuentran disponibles en la página Rat Genome Data base https://rgd.mcw.edu/. Las reacciones de PCR fueron realizadas según el protocolo sugerido por el fabricante de los reactivos locales, así como también las condiciones de ciclado. La electroforesis en gel de agarosa fue adaptada a las condiciones de nuestro laboratorio y los productos disponibles en nuestro país. Para la estandarización de la técnica se utilizó el ADN de cepas de ratas BN y SD/RiJ cedidas gentilmente por el Dr Benavides. La validación de la técnica se llevó a cabo por 2 operarios distintos, utilizando 2 termocicladores diferentes para evaluar la robustez de la misma. Se lograron amplificar exitosamente los 26 SSLP seleccionados, obteniéndose el patrón de bandas esperado para los controles utilizados. La técnica realizada con ADN de las cepas BN y SD/RiJ mostró ser robusta obteniéndose resultados idénticos por operarios diferentes y en equipos diferentes. Estos 26 microsatelites se encuentran distribuidos a lo largo de los 18 cromosomas autosómicos de la rata. Se logró adaptar la técnica de detección de SSLP para caracterizar las cepas de ratas endocriadas, nuestro próximo objetivo es incorporar a nuestro panel de microsatelite, aquellos que nos permitan diferenciar cepas de Wistar y SHR las cuales son las más utilizadas en nuestro país.