Optimización de protocolos de PCR para amplificación de marcadores moleculares de Leptospiras en muestras de agua

AGUSTIN VANZETTI; RUEDA, EVA; CRISTALDI, MAXIMILIANO; ILEANA BALETTE; JULIETA CARLETTI; MARIA ANDREA PREVITALI

Congreso; I Congreso Virtual Iberoamericano de Salud Ambiental; 2021

La leptospirosis es una enfermedad causada por bacterias del género Leptospira. Estas bacterias son ubicuas, y pueden encontrarse como saprófitas (no infecciosas) en diversos ambientes, como agua o ambientes húmedos y también como patógenas que pueden causar infecciones en animales y en el ser humano. La leptospirosis es una de las principales enfermedades zoonóticas en nuestra región (MSAL, 2016), suele estar asociada a eventos de inundación y a sectores sociales marginados. Las personas contraen leptospirosis principalmente por el contacto con agua o barro contaminados con la bacteria que puede permanecer en ambientes húmedos por semanas o meses. A pesar de que la leptospirosis se ha investigado en diversas partes del mundo por décadas, aún se desconocen los mecanismos que promueven la supervivencia de las leptopiras patógenas en el ambiente (Picardeau, 2017). El objetivo de este trabajo fue optimizar un protocolo que permita identificar leptospiras presentes en cuerpos de agua mediante la amplificación de marcadores moleculares por PCR.Se recolectaron 100 ml (dos réplicas de 50 ml) de muestra de agua de 11 sitios de tres barrios de la ciudad de Santa Fe, Argentina entre los meses de junio y julio del 2019. Además, en cada sitio se registraron variables físico-químicas que pueden influir en la persistencia de la bacteria. Seguidamente las muestras se filtraron con filtros de nitrocelulosa (0.22 µM) de los cuales se extrajo ADN (Murray y Thompson, 1980). Los extractos de ADN se amplificaron con un set de primers específicos para Leptospira. Los productos de PCR fueron analizados en geles de agarosa al 2%. Se optimizaron los protocolos para dos juegos de primers Sapro1/Sapro2 (Murgia, 1997) y Lipl32-45F/Lipl32-285R (Stoddard et al., 2009).Los factores ambientales registrados mostraron gran variabilidad entre los cuerpos de agua de un mismo barrio. Se obtuvieron 19 muestras positivas para posibles leptospiras saprofíticas con los primers Sapro1/Sapro2 y una sola muestra positiva para leptospira patógena con los primers Lipl32-45F/Lipl32-285R El trabajo realizado permitió desarrollar un protocolo para poder detectar leptospiras con mayor facilidad y que incluye a diferentes especies de la bacteria.