CINÉTICA Y MECANISMO DE MUERTE MEDIADA POR LÍQUIDO PLEURAL TUBERCULOSO: RÁPIDA INDUCCIÓN DE LA VÍA MITOCONDRIAL DE APOPTOSIS EN CÉLULAS NATURAL KILLER (NK).

PABLO SCHIERLOH, NOEMI YOKOBORI, MERCEDES ALEMÁN, ROSA MUSELLA, JORGE CASTAGNINO, MATÍAS BALDINI, LAURA GEFFNER, EDUARDO ABBATE, SILVIA DE LA BARRERA, MARÍA DEL CÁRMEN SASIAIN.

Mar del Plata

Congreso; LI SAIC-LIV SAI; 2006

Soc. Arg. de Invest. Clínica y Soc. Arg. de Inmunología

En trabajos anteriores observamos que factores solubles presentes en el derrame pleural tuberculoso (TB-LP) inducen apoptosis de células NK. A fin de caracterizar la cinética de este proceso medimos, por citometría de flujo, la expresión superficial de fosfatidil serina (PS), de CD16 y el contenido nuclear en células NK (CD3-CD56+) a lo largo de 72hs de cultivo de linfocitos periféricos en TB-LP o en medio (n=9). Los resultados muestran una secuencia de eventos iniciada por la reducción significativa del %NK CD16+ dentro de las primeras 6hs de cultivo (Medio=86±2%, TB-LP=40±12%, p<0.05 ) seguida de un  aumento del %NK Annexina V+(AV) a las 24hs (Medio=6±3%,  TB-LP=67±10%, p<0.005 ) y finalmente un aumento del %NK sub-G1 a partir de las 48hs (Medio=6±2%, TB-LP=45±8%, p<0.01).  Para identificar el mecanismo de muerte, analizamos la activación de  caspasa 3 (Csp 3)  y  realizamos cultivos en presencia de inhibidores farmacológicos de Csp 8 y Csp 9.  A las 18hs de cultivo encontramos un aumento en el %NK Csp 3-activa+ (Medio= 1,4±2,1%,  TB-LP=21±5%, p<0.01).  Por otra parte,  solo el tratamiento con el inhibidor (inh) de Csp 9 redujo el %NK AV+ (TB-LP=76±6%,  inh-Csp9 +TB-LP=47±10% (p<0.05), inh-Csp8 +TB-LP= 72±4% (p>0.1)). Finalmente, evaluamos la actividad mitocondrial en linfocitos depletados de células CD3+/CD20+ cultivados en TB-LP, por medio del ensayo de reducción de MTT.  A 3 hs de cultivo, donde  la viabilidad celular no se ve afectada, encontramos una significativa disminución del MTT-reducido (Medio=90±5%, TB-LP= 48±8%, p<0.02) indicando que la perdida de la función mitocondrial es un evento inicial previo a la muerte. Los resultados demuestran que componentes solubles presentes en el TB-LP inducen la vía mitocondrial de apoptosis, en un proceso que involucra la activación de caspasas efectoras seguida de disminución de receptores de superficie, culminando con muerte de las células NK.