Rol del receptor de colágeno (GPIA) en la producción plaquetaria en pacientes con DPF/LMA

GLEMBOTSKY AC.; MARTA RF.; GOETTE NP.; MARIN OYARZUN CP.; MOLINAS FC.; RASLOVA H.; HELLER PG.

Jornada; XIII Jornadas Científicas del Instituto Alfredo Lanari; 2016

El desorden plaquetario familiar con predisposición a leucemia (DPF/LMA), es una trombocitopenia hereditaria causada por mutación de RUNX1, factor de transcripción que regula múltiples genes megacariocíticos. Análisis de microarrays de expresión de megacariocitos donde se inhibió RUNX1, mostraron disminución de GPIa. La GPIa, (integrina α2β1) es un receptor de colágeno que tiene un rol en la hemostasia primaria y en la producción plaquetaria. En estudios previos en nuestro laboratorio hallamos disminución de la expresión plaquetaria de GPIa y de la respuesta al colágeno en pacientes con DPF/LMA. Con el objetivo de investigar la fisiopatogenia de la alteración de la producción plaquetaria en este desorden, se evaluaron distintas fases de la megacariocitopoyesis y trombopoyesis como asi también la expresión y funcionalidad de GPIa en los megacariocitos (MKs). Se cultivaron células CD34+ de sangre periférica de pacientes DPF/LMA y controles. Se evaluó la formación de colonias megacariocíticas con el fin de estudiar la capacidad de diferenciación y proliferación de los progenitores hematopoieticos, la pureza (CD41+), la maduración (CD41+CD42+) y la expresión de GPIa en los MKs obtenidos, por citometría de flujo; la adhesión al colágeno y la etapa de formación de proplaquetas. En medio semisólido a base de colágeno (Megacult) en presencia de citoquinas (TPO, IL6, IL3, FLT3 y SCF), se halló disminución del número y tamaño de las colonias megacariocíticas en los pacientes (n=3) respecto a controles (n=5), 10,5±1,8 vs. 63,8±12,6, respectivamente, p=0,035, test de Mann-Whitney. En cultivo líquido, el % de MKs totales, fue menor en los pacientes (n=2) que en los controles (n=3) 23.4±0.4% vs 53,8±12.0%, también la fracción de MKs maduros (CD41+CD42+) resultó 3.4±3.3% vs 16.4±6.5% y hubo ausencia de formación de proplaquetas, confirmando resultados previos.La expresión de GPIa en los MKs de pacientes(n=2) fue menor que en los controles (n=3), 28.6±16.6% vs 89.7±3.5%. Para evaluar el correlato funcional de esta disminución, se midió la adhesión a matrices de colágeno tipo I monomérico y fibrilar de los MKs incubados durante 16 hrs y posterior tinción con faloidina TRITC, que se une a laactina polimerizada del citoesqueleto, y CD61-FITC, marcador especifico de linaje megacariocítico, utilizando microscopio de inmunofluorescencia. Hubo menor adhesión tanto sobre conformación fibrilar,13±2.9, como monomérica, 19.9±0.9 % de MK adheridos de pacientes respecto al control establecido como 100%, sugiriendo que la reducción en GPIa altera el comportamiento de megacariocitos sobre este sustrato. La alteración de la interacción MK-colágeno, crítica para prevenir la formación prematura de las proplaquetas y plaquetas en el nicho osteoblástico de la médula ósea, puede contribuir a la alteración de la producción plaquetaria del DPF/LMA, que como hallamos previamente, involucra distintos estadíos de la producción plaquetaria. La GPIa disminuida en megacariocitos y plaquetas sumada al hallazgo de sitios de unión para RUNX1 en el promotor GPIa (ITGA2) mediante análisis in silico sugiere que éste podría ser un blanco de RUNX1 en el megacariocito, evaluado mediante estudios en curso.