Estudio del efecto del anagrelide sobre la trombopoyesis en un modelo de cultivo de megacariocitos

ESPASANDIN YR.; MARTA RF.; VALENTINO J.; GLEMBOTSKY AC.; LEV PR.; GOETTE NP.; MOLINAS FC.; HELLER PG.

Jornada; X Jornadas Científicas del Instituto de Investigaciones Médicas Alfredo Lanari; 2011

El anagrelide (ANA) disminuye las plaquetas en pacientes con Trombocitemia Esencial. Previamente hallamos que, además de su acción en la maduración del MK, inhibe la fase final de la producción plaquetaria o trombopoyesis, caracterizada por la formación de procesos proplaquetarios (PP) a partir del MK, de cuyos extremos se liberan las plaquetas. Sin embargo, esta disminución en la formación de PP observada con la dosis ensayada (500nM) se asoció a inhibición concomitante de la maduración y viabilidad del megacariocito (MK). Para discernir entre ambos efectos, en este trabajo, se cultivaron MK a partir de progenitores hematopoyéticos CD34+ de cordón umbilical y se incubaron al día 13 con dosis decrecientes de ANA. El % de MK formadores de PP en cultivos control fue 3.23±1.9% y con ANA 500nM, 250nM, 100nM, 50nM, 25nM, 10nM, 5nM, 0.07±0.1%, 0.07±0.1%, 0.34±0.1%, 0.54±0.2%, 1.48±0.2, 1.55±0.1%, 2.22±0.1%, comprobándose que dosis ≤100nM no modificaron la viabilidad ni maduración del MK. En experimentos posteriores con ANA 50nM (n=6) vs control, se halló disminución del % de MK formadores de PP, 0.31±0.2% vs 1.47±1.1%, p=0.03, sin diferencias en la pureza, %CD41: 70.8±18 vs 70.7±18, maduración, %CD41+42b+: 54.6±17 vs 57.2±21 y viabilidad del MK: 31.6±15% vs 33.7±20%. Para investigar el mecanismo subyacente, nos propusimos estudiar la expresión de moléculas involucrados en la trombopoyesis. Se incubaron MK maduros, purificados por cell sorter (pureza 98%), con ANA 50nM y se estudió por PCR en tiempo real el factor de transcripción NF-E2 (isoforma f), cuya expresión relativa (2-ΔΔCt) en MK tratados con ANA (vs control=1) fue 1.1. El estudio de otras moléculas con rol clave en la trombopoyesis, como Rab27b, tubulina, MAL/SRF y la cadena liviana de la miosina, en curso, contribuirá a establecer si el efecto sobre la trombopoyesis está relacionado con la modulación de la expresión génica de los factores que regulan este proceso. La acción directa del ANA sobre las proplaquetas sugiere que el bloqueo de la trombopoyesis contribuye a su efecto reductor de plaquetas, de relevancia en base al aumento de la trombopoyesis descripto recientemente en la Trombocitemia Esencial. Este efecto en la fase final de la producción plaquetaria explicaría la rapidez del inicio de acción de este fármaco durante el tratamiento de los pacientes. Establecer su mecanismo de acción podría contribuir al desarrollo de fármacos que regulen exclusivamente la fase de trombopoyesis, de relevancia considerando que la inhibición de la maduración MK, efecto adicional del ANA, induce la liberación de sustancias que promueven la fibrosis medular.