CASPASA 3 ACTIVA COMO MARCADOR DE APOPTOSIS EN PLAQUETAS DE TROMBOCITOPENIA INMUNE PRIMARIA. SU RELACIÓN CON LA ACTIVACIÓN PLAQUETARIA

GLEMBOTSKY AC.; GOETTE NP.; LEV PR.; GRODZIELSKI M.; PIERDOMINICI MS.; RIVEROS D; MOLINAS FC.; HELLER PG.; MARTA RF.

Congreso; XI Congreso Argentino de Hemostasia y Trombosis.; 2014

En un estudio previo demostramos que las plaquetas circulantes de pacientes con trombocitopenia inmune primaria (PTI) expresan fosfatidilserina (PS) en la cara ex-terna de la membrana y tienen alteración del potencial de membrana mitocondrial (DYm), ambos, marcadores de apoptosis. Teniendo en cuenta que estos eventos pue-den ocurrir también durante la activación de plaquetas, en el presente trabajo decidi-mos ampliar el estudio evaluando la activación de caspasa 3, marcador específico de apoptosis, y la activación de plaquetas en pacientes con PTI. Para ello se estudiaron 12 pacientes adultos; recuento de plaquetas 38±20x109/L. Se evaluó la caspasa 3 ac-tiva mediante la utilización de un inhibidor de caspasas conjugado a un fluorocromo (FLICA) y detección por citometría de flujo. La activación plaquetaria se evaluó tanto en condiciones basales como luego de la estimulación con ADP 20 uM y TRAP 20 uM, mediante la unión de PAC-1-FITC a la glicoproteína (GP) IIb-IIIa activada, la detección de P-selectina en la membrana plasmática por unión de CD62P-FITC, y la internalización de GPIb-IX, todos por citometría de flujo. Se observó aumento de la caspasa 3 activa en las plaquetas en condiciones basales: pacientes 16,6±13,0% vs. controles 5,0±2,1%, (p=0,006, Mann Whitney test), así como luego del agregado de 6uM de ionóforo de calcio (p=0,0375) demostrando un aumento de la sensibilidad a estímulos apoptóticos. Se observó una correlación inversa entre el recuento de plaquetas y el porcentaje de caspasa 3 activa en condi-ciones basales (r=0,599, p=0,0394). En relación con la activación plaquetaria, no se observaron diferencias respecto al grupo control en la unión de PAC-1 en condiciones basales (p=0.6), ni luego de la activación con ADP (p=0.28) ni TRAP (p=0,37). La expresión de P-selectina no solo no se observó aumentada, sino que hubo una dismi-nución de la misma respecto al grupo control en condiciones basales (p=0.074) y por estimulación con TRAP (p=0,083) no alcanzando significación estadística. El grado de internalización de la GPIb-IX fue semejante en pacientes y controles en las pruebas realizadas con los dos agonistas (p=0.426 en ambos casos). La activación de caspasa 3 encontrada en este estudio, conjuntamente con la ausencia de activación plaque-taria en condiciones basales, demuestra que el aumento de la expresión de PS en la membrana y la alteración de DYm observados previamente están relacionados a la presencia de apoptosis de plaquetas en PTI. Este mecanismo sería uno de los factores contribuyentes a la trombocitopenia en este desorden auto-inmune.