Caracterización de partículas plaquetarias producidas por la línea celular megacarioblástica DAMI.

LEV PR; GLEMBOTSKY AC; GOETTE NP.; HELLER PG; POZNER R; CABEZA MECKERT P; LAGUENS R; MARTA RF; MOLINAS FC

Mar del Plata

Congreso; Reunión anual de SAIC; 2008

El estudio de los mecanismos que regulan la producción plaquetaria es un área de investigación creciente. Una dificultad al abordar este tipo de estudios es la elección del modelo para la producción de plaquetas in vitro. En el presente trabajo se estudió la capacidad de la línea celular megacarioblástica DAMI de producir plaquetas por estímulo con PMA entre 5 y 50 nM. La tinción con Hoesch el día 10 de cultivo mostró núcleos poliploides. Por citometría de flujo se observó poliploidización máxima inducida por PMA 25 nM entre el día 7 y 10, que consistió en 43% de células 2N, 38% 4N, 16% 8N, 4% 16N y 1% 32N. Se evaluó la producción de partículas con características de plaquetas a lo largo del tiempo por citometría de flujo, mediante parámetros de tamaño y granulación y positividad para CD61. Se observó un número creciente de partículas plaquetarias a lo largo del tiempo con producción máxima el día 10 (PMA 25-50 nM). La tinción con faloidina-FITC, que identifica actina polimerizada, reveló que una población de partículas posee una estructura semejante a las plaquetas activadas de sangre periférica. Utilizando anticuerpos dirigidos contra glicoproteínas (GP) específicas de plaquetas se observó presencia de GPaIIb (CD41a) y b3 (CD61) y ausencia de GP Ib (CD42b) y IX (CD42a). Los estudios de activación mediante marcación con CD62P por citometría de flujo, mostraron expresión de P-selectina en la membrana de las partículas plaquetarias, (RFI CD62P/isotipo=2.51) (n=3). No se observó la presencia de gránulos intraplaquetarios por marcación con mepacrine (citometría de flujo) ni por microscopía electrónica. Las partículas producidas por la línea celular DAMI presentan características similares a las de sangre periférica (expresión de GPaIIb-b3 y polimerización de actina). La falta de expresión de GP Ib-IX podría deberse al clivaje in vitro por metaloproteasas. La externalización de P-selectina y la ausencia de gránulos podría sugerir una activación basal.