Células DAMI, un nuevo modelo de biogénesis plaquetaria

LEV PR.; GOETTE NP.; GLEMBOTSKY AC.; HELLER PG.; LAGUENS RP.; POZNER RG.; MARTA RF.; MOLINAS FC.

Congreso; LV Reunión Científica Anual. Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC); 2010

Sociedad Argentina de Investigación Clínica

En un trabajo previo se estudió la capacidad para producir plaquetas (plaq) de la línea celular megacarioblástica DAMI. Las células estimuladas con PMA (25 y 50 nM) producen partículas con características similares a las plaq de sangre periférica humana (SP) (expresión de GPIIbIIIa y polimerización de actina), pero con baja o nula expresión de GPIb, ausencia de gránulos intraplaquetarios y expresión basal de P-selectina. Para obtener partículas con mayor similitud a las plaq de SP realizamos una estimulación con dosis diarias de PMA (1mM) y TPO (10ng/ml), 7 días y evaluamos las partículas en el día 10 del cultivo. La expresión de GPIIb-IIIa y GPIb en estas condiciones, así como la activación basal fueron similares a lo observado anteriormente. Se detectó la presencia de gránulos a por inmunomarcación y cuantificación de trombospondina (ELISA) en el sobrenadante (SN) de cultivo (52 ng/ml) y gránulos densos por marcación con mepacrine (RFI: 2.4; plaq SP: 4.4). La presencia de ambos tipos de gránulos fue confirmada por microscopia electrónica. Para investigar la causa de la baja expresión de GPIb en la membrana se determinó (citometría de flujo) la cinética de expresión de GPIb y la presencia de su fragmento soluble (glicocalicina) en el SN del cultivo (ELISA). La GPIb de membrana disminuyó (de 24 a 11.1%) al mismo tiempo que aumentó progresivamente la glicocalicina (de 10 a 16 pg/ml). Por otro lado, la presencia de un inhibidor de metaloproteasas (TAPI) aumentó la expresión de GPIb (de 20 a 28%) indicando que la disminución de la expresión de GP se debe a clivaje proteolítico. La expresión de P-sel, marcador de activación plaquetaria, aumentó por estimulación con trombina (de 16 a 22%). La presencia de gránulos y expresión de GPIIb-IIIa y GPIb demuestran la capacidad de la línea celular DAMI de producir plaquetas, que si bien se encuentran activadas basalmente, son capaces de responder a un estímulo, demostrando su funcionalidad.