Mecanismos por los cuales el anagrelide disminuye las plaquetas

ESPASANDIN YR.; MARTA RF.; GLEMBOTSKY AC.; VALENTINO J.; LEV PR.; GOETTE NP.; GRODZIELSKI M; MOLINAS FC.; HELLER PG.

Congreso; X Congreso Argentino de Hemostasia y Trombosis; 2012

El anagrelide se utiliza para el tratamiento de la Trombocitemia Esencial, aunque los mecanismos por los cuales disminuye las plaquetas se desconocen. Investigamos sus efectos utilizando un modelo in vitro de cultivo de megacariocitos derivados de progenitores de cordón umbilical. Corroboramos que el anagrelide inhibe la maduración del megacariocito y demostramos que además de este efecto ya conocido, inhibe de manera directa la fase final de producción plaquetaria o trombopoyesis, caracterizada por la formación de proplaquetas. El tratamiento de megacariocitos maduros (día 13 del cultivo) con anagrelide 50nM indujo disminución en el %proplaquetas (observación en microscopio invertido), 3,84±1,05% vs 1,13±0,53%, p=0,0002, sin afectar la maduración ni viabilidad. Evaluamos si estos efectos dependen de su única acción farmacológica conocida, la inhibición de fosfodiesterasas (que aumenta AMPc), mediante bloqueo de esta via. Observamos que ni PKI100uM (inhibidor proteinquinasa A) ni RpAMPc500uM (antagonista de AMPc) revirtieron el efecto del anagrelide en la maduración (citometría de flujo, %CD41+42+), control, anagrelide, PKI+anagrelide, RpAMPc+anagrelide, 61.7±3%, 40.6±3%, 39±3% y 39±2%, respectivamente, p=0.0002 y en las proplaquetas, 2,3±7%, 0,37±0,4%, 0,32±0,3%, 0,38±0,5%, p=0,003 (diferencias significativas control vs el resto en ambos casos). Para investigar el mecanismo inhibitorio de la trombopoyesis, medimos la expresión (PCR en tiempo real) de factores de transcripción involucrados (vs control=1), siendo NF-E2, 1,1±0,35; RUNX, 1,08±1,14; MAL, 1,37±0,29; SRF, 0,94±0,20; y sus blancos, RAB27b, 0,96±0,07; miosina cadena liviana, 1,19±0,21; tubulina, 1,00±0,11, indicando que el anagrelide no induce su disminución. Hallamos reversión parcial del efecto del anagrelide sobre la trombopoyesis al bloquear la miosina con blebistatina100uM, %proplaquetas en control, anagrelide, blebistatina, blebistatina+anagrelide 2,1±0,9%, 0,86±0,2%, 4,81±0,4%, 2,57±0,07% p=