TERAPIA GÉNICA CON INTERFERÓN b. ESTUDIOS IN VITRO.

VILLAVERDE, M. S; KARARA, A. L.,; GLIKIN, G. C.; FINOCCHIARO, L. M. E

Jornada; XXII JORNADAS NACIONALES DE ONCOLOGIA DEL INSTITUTO “ANGEL H. ROFFO”; 2006

TERAPIA GéNICA CON INTERFERÓN b. Estudios in vitro. Villaverde, M. S., Karara, A. L., Glikin, G. C. y Finocchiaro, L. M. E.  Unidad de Transferencia Genética, Instituto de Oncología “Ángel H. Roffo”, Universidad de Buenos Aires, Buenos Aires, Argentina. E-mail: utgroffo@yahoo.com.ar La bioterapia sistémica con interferón tipo I (IFNa/b) es una estrategia antitumoral muy efectiva. Sin embargo, el tratamiento con IFNa/b produce considerable toxicidad sistémica, la que podría evitarse con una administración continua de bajas dosis. Este tipo de farmacocinética podría ser llevado a cabo por la transferencia del gen de IFNa/b como terapia génica. En este trabajo proponemos: i) evaluar la efectividad de la transfección con lipoplexes portadores del gen de IFNb solo o combinado con otras citokinas mediante: a) ensayo de viabilidad con MTS, y b) análisis por citometría de flujo, ii) comparar la efectividad de la respuesta al gen INFb  con: a) el agregado exógeno de la proteína IFNb (1-10000 UI/ml) y b) el sistema de gen suicida timidina kinasa/ ganciclovir (TK/GCV), iii) evaluar la producción de IFN por las células transfectadas por ensayo de actividad biológica. Se utilizaron las líneas celulares humanas establecidas: i) sarcoma de Ewing (EW7 y COH), ii) adenocarcinoma de mama (MCF-7) y iii) adenocarcinoma de colon (HT-29). Todas las líneas evaluadas resultaron sensibles a la terapia genética con  INFb (p<0,01). La combinación con otras citokinas no potenció este efecto. Ninguna de las líneas evaluadas respondió al tratamiento con TK/GCV. El efecto citotóxico del gen INFb disminuyó significativamente (p<0.01) en esferoides multicelulares de EW7 y COH. Sorpresivamente, los pasajes elevados de EW7 y COH se vuelven resistentes  al gen INFb, pero sensibles al sistema TK/GCV. Las células transfectadas liberaron al medio de cultivo entre 1200 y 2600 UI/ml de IFNb. Por otro lado, el agregado exógeno de 3 pulsos de la proteína IFNb (1-10000 UI/ml) presentó un efecto dosis dependiente pero en ninguna de las concentraciones estudiadas fue mayor que el obtenido con el gen IFNb. Por último, la citometría reflejó el efecto necrótico/apoptótico del gen IFNb en monocapas de pasajes bajos de EW7 obteniéndose hasta un 80% de la población en esta ventana. Concluimos que: i) la terapia génica con IFNb tiene significativos efectos necróticos/ apoptoticos en todas las líneas evaluadas, ii) ninguna de las citokinas utilizadas potenció el efecto del gen IFNb, iii) la terapia génica con IFNb  podría ser una buena opción de tratamiento en tumores que no responden al sistema TK/GCV , iv) el aumento en el número de pasajes y la conformación tridimensional del cultivo disminuye la sensibilidad al gen IFNb y v) en este último caso, la terapia génica con TK/GCV podría ser una buena opción para tratamiento de tumores que no responden al IFNb.