Mechanism involved in the synergistic effect of metformin and g6pdh inhibition

ARBE, MARÍA FLORENCIA; AGNETTI, LUCRECIA; GLIKIN, GERARDO CLAUDIO; FINNOCHIARO, LILIANA MARIA ELENA; VILLAVERDE MARCELA SOLANGE

Congreso; Reunion Anual SAIC2018; 2018

SAIC

La mayoría de las células tumorales emplean de manera diferencial el metabolismo respecto de las células normales exacerbando no solo la vía glucolítica (mecanismo conocido como ¨efecto Warburg¨), sino también el ciclo de Krebs (TCA) y la vía de las pentosas fosfato (PPP) permitiéndoles incrementar el fenotipo maligno. Previamente, nuestro grupo describió un efecto citotóxico sinérgico en ocho líneas de melanoma humano utilizando metformina (MET, inhibe el complejo I de la cadena mitocondrial e indirectamente a mTOR) en combinación con 6-aminonicotinamida (6AN, inhibe la G6PDH, enzima limitante de PPP). El objetivo del presente trabajo fue determinar la variación en los parámetros metabólicos y los mecanismos desencadenados por la utilización de MET en combinación con 6AN. Este estudio se realizó en tres líneas celulares de melanoma humano, hM1 (BRAFV600E) y hM4 (BRAFV600R) ambas establecidas a partir de tumores provenientes de pacientes de IOAHR y A375 (BRAFV600E), una línea comercial. Las células tratadas tanto con 6AN como con la combinación MET/6AN mostraron un menor consumo de glucosa y una menor producción de lactato respecto de las tratadas con MET o células control (ambos parámetros evaluados mediante espectrofotometría con kits comerciales). Como parte de los mecanismos promovidos medimos los oxidantes intracelulares (sonda DCF-DA) y el potencial de membrana mitocondrial (sondas TMRM y Mitotracker CMXRos) por citometría de flujo. Observamos que a corto plazo MET/6AN promovió la despolarización de la membrana mitocondrial mientras que aumento los oxidantes intracelulares. En contraste, las células que sobrevivieron a largo plazo exhibieron una hiperpolarización mitocondrial. También, pudimos determinar un incremento en la complejidad intracelular en células tratadas con MET/6AN. Por otro lado, al evaluar los mecanismos de apoptosis y necrosis mediante Anexina V-IP y la tinción NA-BrEt pudimos determinar que las células tratadas con MET/6AN exhibieron un aumento de los eventos apoptóticos tardíos o necróticos junto con un aumento en la población Sub G0 al evaluar el ciclo celular. En su conjunto, nuestros resultados sugieren que la combinación de metformina con la inhibición de la G6PDH conduce a la muerte celular por una drástica pérdida del metabolismo glucolitico con alteración de la funcionalidad mitocondrial y un desbalance oxidativo.