EFECTOS DE LA COMBINACIÓN DE LOS GENES DE LA TIMIDINA QUINASA DEL VIRUS HERPES SIMPLEX Y DEL INTERFERÓN BETA CANINO SOBRE CULTIVOS 2D Y 3D DE CÉLULAS DE MELANOMA ESPONTÁNEO CANINO

GIL CARDEZA, ML; VILLAVERDE, MS; ROSSI, UA; FINOCCHIARO LME; GLIKIN GC

Mar del Plata, Buenos Aires, Argentina

Congreso; LV REUNION CIENTIFICA ANUAL Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2010

Con el fin de estudiar la sensibilidad a la terapia génica del gen de la timidina quinasa del virus herpes simplex (HSVtk) con agregado de 1 µg/ml de ganciclovir (HSVtk-GCV) y del gen interferón beta canino (cIFNb) se co-lipofectaron 4 líneas celulares derivadas de melanoma espontáneo canino, Ak, Bk, Br y Rkb, con plásmidos que expresan HSVtk y cIFNb (psCMVHSVtk; psCMVcIFNb) complejados con liposomas catiónicos. Como controles se co-lipofectó el plásmido que expresa el gen de la β-Galactosidasa de E. coli (psCMVbGal) con cada uno de los plásmidos terapéuticos. El efecto de los tratamientos se evaluó sobre las células creciendo en dos configuraciones espaciales, monocapa (2D) y esferoides (3D), pues los esferoides recrean más fielmente que la monocapa las áreas pobremente oxigenadas y la resistencia multicelular presente en los tumores in vivo. Los esferoides se formaron sembrando el número de células necesario para obtener un esferoide único por pozo (placas de 96 pozos) sobre 1,5% de agar (500 células por pozo de Ak y 5000 células por pozo de Bk, Br o Rkb). La viabilidad celular se evaluó al cabo de 5 días para los cultivos 2D y de 12 días para los cultivos 3D con el ensayo de la fosfatasa ácida (APH). En 3 de las 4 monocapas (Ak, Br y Rkb) prevaleció el efecto del gen cIFNb sobre el del sistema HSVtk-GCV (p<0,05 HSVtk-GCV+bGal vs HSVtk-GCV+cIFNb y n.s. cIFNb+bGal vs HSVtk-GCV+cIFNb) mientras que en Bk la co-lipofección de los genes terapéuticos produjo un efecto mayor que las co-lipofecciones controles tanto en la monocapa como en los esferoides (p<0,05 cIFNb+bGal y HSVtk-GCV+bGal vs HSVtk-GCV+cIFNb). En los esferoides de Rkb se mantuvo la prevalencia del gen cIFNb sobre el sistema HSVtk-GCV mientras que en los esferoides de Ak y Br, que presentan una tasa de crecimiento mayor que los anteriores, se invirtió la prevalencia: el sistema de HSVtk-GCV fué más efectivo que el gen de cIFNb (p<0,05 cIFNb+bGal vs HSVtk-GCV+cIFNb y n.s. HSVtk-GCV+bGal vs HSVtk-GCV+cIFNb).