La terapia con el gen hIFNbeta produce aumento de oxidantes y perdida del potencial mitocondrial

VILLAVERDE MS; GIL CARDEZA ML; ROSSI, UA; GLIKIN GC; FINOCCHIARO LME

Mar del Plata, Buenos Aires, Argentina

Congreso; LV REUNION CIENTIFICA ANUAL Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2010

En nuestro laboratorio demostramos que la lipofección del gen interferon beta humano (hIFNb) complejado con liposomas catiónicos es altamente efectivo en distintas líneas tumorales humanas. Más aún, es efectivo en la línea de melanoma humano, M8, resistente al tratamiento con la proteína recombinante beta (rhIFNb). Con el fin de dilucidar cuales son los mecanismos diferenciales entre el tratamiento génico y la proteína recombinante comparamos: a) la producción de especies oxidantes (DCDHFDA), b) el potencial mitocondrial (MitotrackerRedCMXRos) y c) la sensibilidad al estrés oxidativo (MTS), en dos líneas tumorales humanas: i) M8 (sensible al hIFNb y resistente a la rhIFNb) y ii) EW7 (sarcoma de Ewing, sensible a ambos tratamientos). Las líneas fueron sembradas en monocapas y i) lipofectadas con el gen bgal o hIFNb; ii) incubadas con rhIFNb (1000 UI/ml, 1 pulso por día durante 3 días) o iii) incubadas con H2O2 (1-1000 µM). A los 5 días post tratamiento encontramos que la lipofección del gen hIFNb fue capaz de aumentar las especies oxidantes y promover la caída del potencial mitocondrial en ambas líneas mientras que rhIFNb presentó estos efectos en la línea sensible EW7 pero no fue capaz de hacerlo en la línea resistente M8. Por otro lado, EW7 resulto 10 veces más sensible al estrés oxidativo que M8 (EW7IC50:35 µM vs M8IC50:380 µM). Por lo tanto, concluimos que el incremento de las especies oxidantes en paralelo a la caída del potencial mitocondrial serían eventos necesarios para la efectividad del interferón beta. Es probable que, la resistencia al estrés oxidativo sumada a la baja capacidad de rhIFNb de generar una concentración efectiva de oxidantes contribuya a la resistencia observada en M8. En cambio, la transferencia genética, al potenciar mecanismos mitocondriales amplificadores de la apoptosis, ofrecería una estrategia más efectiva que el uso de la proteína recombinante para una neoplasia como el melanoma, altamente resistente a las terapias convencionales