Detección de vitelogenina mediante Western blot en ejemplares juveniles de Cyprinus carpio expuestos a desorganizadores endócrinos.

SCARCIA, P; CALAMANTE; GABRIELA; DE LA TORRE, F.R.

Congreso; XI Congresso Brasilero de Ecotoxicología, XI Ecotox; 2010

Sociedad Brasilera de Ecotoxicologia

La vitelogenina (Vtg) es una proteína hepática sintetizada en respuesta a un estrogéno endógeno  el 17 ß-estradiol (E2) que se utiliza en los peces como biomarcador de exposición a compuestos estrogénicos tales como los alquilfenoles polietoxilados y sus metabolitos (ej. nonilfenol, NP).  Los objetivos del presente trabajo fueron obtener un antisuero dirigido contra la proteína Vtg de Cyprinus carpio y utilizarlo como herramienta para la detección de la exposición a desorganizadores endócrinos en ejemplares juveniles. Para cumplir con el primer objetivo se utilizó la estrategia de expresión de proteínas recombinantes en bacterias, utilizando el sistema pRSet/E. coli BL21. Así, se expresó el fragmento de Vtg correspondiente a las posiciones aminoacídicas 282-526 como proteína de fusión a un tracto de 6 histidinas, y se purificó a través de una columna de afinidad de níquel. La proteína recombinante purificada (denominada VTG-B) se inyectó en ratones Balb/C y se determinó la presencia de anticuerpos específicos contra la proteína recombinante mediante Western blot. Además, se confirmó la especificidad del suero mediante inmunoensayos donde se detectó reactividad en muestras de plasma de carpas inyectadas intraperitonealmente con E2 (10mg/Kg p.c). Para cumplir con el segundo objetivo, se realizó un ensayo de Western blot utilizando el anticuerpo anti-Vtg-B obtenido para detectar en los juveniles de C. carpio la exposición a desorganizadores endócrinos mediante inyección de nonilfenol (NP, 100 mg/kg p.c) o por exposición prolongada in situ en jaulas en el Río Luján, Río de la Plata o el arroyo Durazno (sitio con escaso impacto antrópico). Se observó la presencia de bandas reactivas de alto peso molecular (130-170 kDa) en las muestras de plasma de las carpas inyectadas con E2, NP y en las que permanecieron en el Río Luján, en donde se detectó la presencia de nonilfenol en sedimento (350-915 ug/kg). No se observaron bandas reactivas en las muestras de carpas inyectadas con aceite de maíz, ni en las provenientes del arroyo Durazno y Río de la Plata, sitio en el cual prevalece el aporte de hidrocarburos como contaminantes antrópicos. Estos resultados confirman la especificidad y utilidad del suero obtenido contra la vitelogenina de C. carpio determinando que la evaluación de la expresión de Vtg por inmunodetección utilizando el anticuerpo antiVtg-B constituye un biomarcador de exposición apropiado para evaluar sustancias estrogénicas presentes en el ambiente. (Financiación: PICT2005 Nº 35913, UNLu)