La metilación del ADN por la enzima ADN adenina metiltransferasa participa en la regulación del mecanismo de recombinación de la integrasa de tipo 1 en Salmonella enterica

GAMBINO AS; QUIROGA MP; GALÁN AV; CERQUETTI MC; CENTRON D; SARNACKI SH

Rosario

Congreso; XIV Congreso Argentino de Microbiología, XXIII Congreso Latinoamericano de Microbiología (CAM/ALAM 2016); 2016

Asociación Argentina de Microbiología

Lasinfecciones bacterianas por cepas multirresistentes(MDR) y con extrema resistencia (XDR) de la familia Enterobacteriaceaeconstituyen una amenaza creciente y compleja para la salud humana a nivelglobal. En este último tiempo se documentó la capacidad de ciertas enterobacterias deocasionar brotes intrahospitalarios a través de la dispersión de clonesepidémicos MDR portadores de integrones. Esta situación infectológicaorigina importantes repercusiones clínicas y terapéuticas, ya que aumenta la morbi-mortalidadnosocomial, limita las opciones terapéuticas e incrementa la transmisibilidad aotros microorganismos. Los integrones son elementos genéticos movilizables,claves en la captura y dispersión de genes de resistencia a antibióticos (ATBs) quese encuentran bajo forma cassettes entre las bacterias Gram-negativas.Se han caracterizado más de 130 cassettesderesistencia pertenecientes a todas las familias de ATBsdisponibles en el mercado para uso clínico. En este contexto, el conocimientode la regulación de la integrasa detipo 1, IntI1, es esencial para encontrar nuevos blancos terapéuticos queayuden a mitigar la problemática de la evolución hacia fenotipos XDR en elnicho nosocomial. La participación de la enzima ADN adenina metiltransferasa(Dam) como un regulador de la expresión génica, afectando desde la virulenciahasta elementos móviles del genoma, fue parcialmente investigada. En estecontexto, nos preguntamos si la enzima Dam modula el mecanismo de recombinación deIntI1, enSalmonella spp.. Porello nos planteamos como objetivo general determinar y comparar las frecuenciasde recombinación de cassettesde resistencia a ATBs (GCRA) relevantes en la clínicamédica, entre una cepa salvaje y una mutante damde Salmonellaspp..Seanalizaron 4 GCRA, con y sin secuencias 5?-GATC-3? metilables por la enzima Damen el sitio de recombinación que se localiza río arriba de dicho gen cassette (attI1 ó attC enestructuras attI1-blaVIM-2-attCblaVIM-2;attCdfrA1-aadA1-attCaadA1 y otros) en ensayos de recombinaciónmediados por IntI1 en E. coli TOP10, S. Typhimurium LT2 y S. Typhimurium LT2Δdam. Nuestros resultados muestran que lasfrecuencias de recombinación resultaron iguales entre S.Typhimurium LT2y E.coliTOP10,lo cual refleja la cercanía taxonómica entre estas dos especies bacterianas.Interesantemente, identificamos un aumento de más del 100% en las frecuenciasde recombinación en la cepa mutante dam respecto de la cepa parental. Estosresultados indican que Dam participaría, de alguna forma, en la regulación deeste mecanismo de recombinación teniendo implicancias en la diseminación de cassettes.