INVESTIGADORES
QUIROGA Maria Paula
congresos y reuniones científicas
Título:
Estudio de la dispersión e identificación funcional de integrones complejos de clase 1
Autor/es:
QUIROGA MP; ARDUINO SM; MERKIER AK; QUIROGA C; PETRONI A; ROY PH; CENTRON D
Lugar:
Ciudad Autónoma de Buenos Aires
Reunión:
Congreso; XIII Congreso Argentino de Microbiología 2013 y II Congreso de Microbiología Agrícola y Ambiental 2013; 2013
Institución organizadora:
Asociación Argetina de Microbiología
Resumen:
La emergencia de β-lactamasas de espectro extendido y la resistencia a
quinolonas mediada por plásmidos en Argentina están asociadas con la
diseminación de integrones complejos de clase 1. Sin embargo, su distribución por
especies no ha sido bien establecida. Estos integrones también se llamaron
elementos ISCR1 porque comparten una
región común que incluye al gen orf513
y se identificó como Insertion
Sequence Common Region 1 (ISCR1). Generalmente
están formados por: i) un integrón de clase 1 con la región 5?-CS, la región variable
(vr-1), y la región 3?-CS; ii) el gen orf513,
que codifica a la presunta
recombinasa Orf513 relacionada con las transposasas IS91-like; y iii) la región variable 2 (vr-2) que codifica una gran
variedad de genes de resistencia a antibióticos, seguida de una duplicación de
la región 3?-CS. Las transposasas IS91-like
tienen en sus extremos a las regiones oriIS y terIS y se movilizan
por un mecanismo de círculo rodante llevándose ADN adyacente a terIS. En el caso de ISCR1, se sugirió que se movilizaría por
un mecanismo de círculo rodante aberrante, que terIS se perdió, y se propuso un posible oriIS. El objetivo de
este trabajo fue analizar la distribución de los integrones complejos de clase
1 a través del tiempo y evaluar la funcionalidad de la proteína Orf513. Evaluamos
la presencia de los genes orf513, blaCTX-M-2, dfrA3b, qnrB10 and blaDHA-1 mediante PCR y secuenciación, y su asociación
con integrones de clase 1 en 451 aislamientos clínicos no relacionados
epidemiológicamente, resistentes al menos a 1 cefalosporina de espectro
extendido y a un aminoglicósido, aislados entre 1.989 y 2.010 en 7 hospitales
de la Ciudad Autónoma de Buenos Aires. Analizamos la distribución mundial y
plataformas genéticas de los integrones complejos de clase 1 y de los genes blaCTX-M-2 y qnrB mediante estudios bioinformáticos. Evaluamos la
funcionalidad de Orf513 mediante Electrophoretic Mobility Shift Assay (EMSA) en condiciones no desnaturalizantes,
utilizando la proteína purificada y fragmentos de ADN marcados con α-[32P]-dCTP.
Observamos que la epidemiología de
los integrones complejos de clase 1 es notablemente diferente entre
aislamientos clínicos fermentadores (94/171) y no fermentadores (1/280).
Encontramos la presencia de ISCR1::qnrB10 desde el año 1.993 y que In35::ISCR1::blaCTX-M-2
fue el integrón más común, especialmente en P.
mirabilis. Observamos que los integrones asociados con blaCTX-M-2 o qnrB10,
se dispersaron desde Argentina hacia el resto del mundo en los 80 y 90,
respectivamente. Además,
demostramos que Orf513 reconoce secuencias de ADN que contienen al oriIS propuesto. La identificación de propiedades funcionales de Orf513 así
como el mantenimiento a través del tiempo de los integrones complejos de clase
1 en nuestros aislamientos clínicos, destaca su rol en la dispersión de las
plataformas genéticas que codifican múltiples determinantes de resistencia
asociados a diferentes elementos móviles que promueven su dispersión.