Análisis de integrones cromosómicos en aislamientos de Vibrio Cholerae O1 de Argentina

QUIROGA MARÍA PAULA; VIÑAS MR; PICHEL MARIANA; GONZÁLEZ FRAGA S; CENTRÓN DANIELA

Ciudad Autónoma de Buenos Aires

Congreso; XII Congreso Argentino de Microbiología, VI Congreso Argentino de la Sociedad Argentina de Bacteriología, Micología y Parasitología Clínica, SADEBAC, I Congreso de Microbiología Agrícola y Ambiental; 2010

Asociación Argentina de Microbiología

Entre 1992 y 1999 se produjeron siete brotes de cólera en Argentina. Vibrio cholerae O1 (VC O1), el agente etiológico del cólera posee integrones cromosómicos que son estructuras genéticas localizadas en el genoma del microorganismo, que codifican un sistema de recombinación compuesto básicamente por el gen intI4 que codifica una integrasa que es una recombinasa sitio específica capaz de insertar y escindir genes cassettes en el integrón, un sitio de recombinación attI4, y una serie de cassettes compuestos por un marco de lectura abierto y un sitio de recombinación VCR.  La integrasa IntI4 reconoce al gen cassette por su VCR y cuando lo inserta en la primera posición del integrón, este queda localizado adyacente al attI4. Los integrones cromosómicos de Vibrio cholerae pueden contener más de 150 cassettes, algunos otorgándole resistencia a antibióticos, funciones adaptativas y otros incluso con funciones aun desconocidas. El objetivo de este trabajo fue caracterizar aislamientos de VC O1recuperados durante los períodos epidémicos a través del estudio de los genes cassettes localizados en primera posición en los integrones cromosómicos y sus variaciones en el sitio attI4. Se tomaron 14 cepas representantes por caracterización previa por electroforesis en campo pulsado (PFGE), del clon epidémico asociado a los brotes de cólera y de otros aislamientos de diferentes subtipos, no productores de toxina de cólera (CT). Se realizó la extracción de ADN genómico total y la amplificación de los primeros cassettes de los integrones cromosómicos por PCR utilizando un primer específico para intI4 y otro degenerado con sitio blanco en los VCR.  Posteriormente se purificó la banda de menor peso molecular de cada cepa y se secuenciaron. El análisis de las secuencias se realizó utilizando Los programas Bioedit, BLASTN y CLUSTALW2. Se observaron diferentes ordenamientos de genes cassettes en las cepas analizadas, encontrándose en primera posición los genes cassettes VC_A0294, VC_A0302, VC_A0437, VC_A0411, VC_A0325, qacE-like; algunos de los cuales no se habían descripto anteriormente e incluso se evidenció la presencia de genes cassettes que no habían sido encontrados anteriormente asociados a los integrones cromosómicos de Vibrio cholerae. Los aislamientos toxigénicos asociados a los brotes de cólera se agruparon principalmente en el perfil VC_A0294. A partir del estudio de los sitios attI4, se observó que había variaciones entre los aislamientos estudiados y que se encontraban asociados a diferentes genes cassettes. Conclusiones Los aislamientos de VC O1 analizados presentaron una variedad de ordenamientos de genes cassettes e incluso algunos nunca antes asociados a los mismos y presentaron variaciones en sus sitios attI4, encontrándose la mayor variabilidad entre las cepas CT-negativas, en concordancia con el agrupamiento observado por PFGE.  Se evidenció una vez más la plasticidad genómica de esta especie que la hace tan versátil.