Identificación, caracterización y clonado de GSP1 (secretory granule-specific protein 1), una molécula específicamente expresada durante la diferenciación del eucariota primitivo Giardia lamblia

TOUZ, MC, NORES, MJ Y LUJÁN, HD

Mendoza

Congreso; XXXV Reunión Anual de la SAIB(Sociedad Argentina de Investigación en Bioquímica y Biología Molecular); 1999

Para sobrevivir fuera del intestino del huésped los trofozoítos de G. lamblia sufren cambios metabólicos y morfológicos diferenciándose a quistes. Los trofozoítos carecen de aparato de Golgi y gránulos de secreción pero durante el enquistamiento se observa la biogénesis de estas organelas, la que precede a la formación de una pared extracelular protectora para el parásito. Nuestro objetivo es determinar los mecanismos bioquímicos y genéticos que promueven la formación de los gránulos en este proceso adaptativo. Previamente hallamos dos proteínas (CWP1 y CWP2) localizadas en los gránulos de trofozoítos en proceso de enquistamiento y en la pared de quistes maduros. En este trabajo identificamos una nueva molécula que se expresa durante el enquistamiento y que se encuentra únicamente en los gránulos de secreción. Dos anticuerpos monoclonales (7E7 y 9C3) generados contra gránulos purificados reconocen una proteína de ~25 kDa que se induce de forma similar a CWP1 y CWP2. El rastreo de una genoteca de expresión de ADNc con esos anticuerpos permitió identificar tres clones que fueron luego secuenciados. Los productos de los clones 30 y 37 son reconocidos por el anticuerpo 7E7 y el del clon 41 por 9C3. Experimentos de Southern blots mostraron bandas de idéntico peso molecular al utilizar sondas de ADN marcado de los clones 30, 37 y 41. El análisis de las secuencias obtenidas demostró que los clones 30 y 37 contienen un fragmento común, no así el clon 41. El hecho de que 7E7 y 9C3 reconocieran una proteína de similar peso molecular, la idéntica cinética de inducción de su expresión, su ubicación subcelular común y su patrón en Southern blots sugiere que estos fragmentos pertenecen a un mismo gen. Para comprobarlo, se realizaron PCRs utilizando diferentes combinaciones de sondas diseñadas a partir de la secuencia de las regiones extremas de estos fragmentos. Los resultados mostraron que los clones identificados independientemente por los anticuerpos 7E7 y 9C3 corresponden a un mismo gen cuyo producto llamamos GSP1. La secuencia parcial de este gen no mostró homología significativa con ningún otro conocido, pero sí dominios presentes en proteínas de adherencia por lo que esta molécula podría ser importante en la biogénesis de los gránulos secreción y en el transporte de los componentes de la pared.