Asimetría en la respuesta a pH en vacuolas aisladas

V VITALI, M SUTKA, K ALLEVA, J BELLATI Y G AMADEO

La Plata, Buenos Aires

Congreso; XXXVII Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Biofísica; 2008

SAB

En los vegetales, las vacuolas ocupan la mayor parte del volumen celular y cumplen procesos que garantizan la integridad de la célula: regulan el volumen, mantienen la turgencia y son responsables de la homeostasis del pH citoplasmático. En particular, nos interesa estudiar el efecto del pH sobre el comportamiento de las vacuolas de Beta vulgaris sometidas a gradientes osmóticos y evaluar el papel de las acuaporinas en estos procesos. Previamente demostramos que: i) vacuolas sometidas a gradientes hiposmóticos a pH 7 incrementan su volumen, inhibiéndose completamente esta respuesta por acidificación[1], ii) vesículas de tonoplasto sometidas a gradientes hiperosmóticos muestran un 40% de inhibición de cambio de volumen a pH ácido[2]. Papel de acuaporinas: Con el objeto de discriminar si la inhibición del cambio de volumen observada a pH 6 es debida al cierre de las acuaporinas, estudiamos el efecto de la acidificación sobre una de las acuaporinas de tonoplato. Para ello, BvTIP1 fue subclonada y expresada en ovocitos de Xenopus laevis. Los estudios funcionales mostraron un alto coeficiente de permeabilidad osmótica (Pf) de 80.3 ± 7.7 10-4 cm s-1 al aplicar gradientes hiposmóticos. Sin embargo, al incubar los ovocitos a pH ácido intracitoplasmático, el valor de Pf no fue significativamente diferente (85.5 ± 6.5 10-4  cm s-1) del obtenido a pH control, mostrando que, al menos esta proteína es insensible a pH. Asimetría en los cambios volumétricos: En el caso de vacuolas aisladas se observa una respuesta asimétrica tanto al cambio de volumen (8% de aumento frente a un gradiente hiposmótico versus 20% de encogimiento en hiperosmótico) como también a la acidificación del medio (pH 6, solo inhibición en condiciones hiposmóticas). Proponemos que otros transportadores además de las acuaporinas estarían involucrados generando esta asimetría.     [1] Amodeo G, Sutka M, Dorr R, Parisi M. J Membr Biol, 2002, 187:175-184. [2] Sutka M, Alleva K, Parisi M, Amodeo G. Biol cell, 2005,  97:837-846.