Clonado de una novel acuaporina perteneciente al subtipo PIP2 en fruto maduro de frutilla (Fragaria x ananassa)

MUT P, BUSTAMANTE C, M MARQUEZ, ALLEVA K, SUTKA M, MARTINEZ G, CIVELLO M, AMODEO G.

Rosario

Congreso; XIII Reunión Latinoamericana y XXVII Reunión Argentina de Fisiología Vegetal; 2008

SAFV

Recientemente hemos clonado y caracterizado una acuaporina del subtipo 1 de membrana plasmática, específica para frutilla madura (FaPIP1;1), que presenta como característica funcional una capacidad para transportar agua que se encuentra condicionada a la presencia otras acuaporinas (Mut et al., 2008 Physiol Plant 132:538-51). A pesar de que en frutos en general se reportan mayoritariamente acuaporinas de subtipo PIP1, nuestros hallazgos plantean que: 1) acuaporinas subtipo PIP2, no descriptas aun en frutilla deben estar presentes en el fruto maduro, y 2) su presencia actuaría como moduladora de la actividad de FaPIP1. Nuestros resultados confirmaron en primer lugar por western blot la presencia de acuaporinas subtipo PIP2 en membrana plasmática extraídas de fruto maduro (utilizando anticuerpos antiPIP2 de Arabidopsis). El clonado de acuaporina(s) del subtipo PIP2 se realizó mediante la técnica de PCR utilizando como molde una biblioteca de ADNc de fruto maduro de frutilla. Se diseñaron cebadores degenerados sobre regiones conservadas de genes ortólogos, con los cuales se amplificó parte de la zona codificante de la proteína,  y luego se utilizaron cebadores específicos para completar el clonado de los extremos.  El fragmento completo resultante fue una única secuencia, con un ORF de 843 pb, que predice una proteína de 282 aminoácidos con una masa molecular de 29.8 kDa. La novel proteína posee los sitios conservados de canal de agua con predicción de su localización en membrana plasmática, que finalmente se denominó FaPIP2;1. Presenta además una alta homología con otras acuaporinas de fruto: 90,4% con PyPIP2;2 y 88,3% VvPIP2;1. Se plantea finalmente un posible modelo de regulación de la expresión de ambas acuaporinas y su papel en la modulación del flujo de agua transmembrana en los distintos estadios de maduración.