Caracterización de las acuaporinas intracelulares BvTIP1 y BvTIP4.

M. SUTKA, J. BELLATI, M. MÁRQUEZ, V. VITALI, K. ALLEVA Y G. AMODEO.

Quilmes, Pcia de Buenos Aires.

Taller; Taller de la Sociedad Argentina de Biofísica: "Biofisica de macromoléculas: aspectos estructurales e implicancias biológicas y biotecnológicas".; 2007

SAB

Las acuaporinas son proteínas específicas que permiten el movimiento de agua a través de las membranas. En plantas, los canales para agua fueron clasificados en cuatro subfamilias de acuerdo a su localización subcelular: PIPs (plasma membrana intrinsic protein), TIPs (tonoplast intrinsic protein), NlPs (Nodulin 26-like membrane intrinsic protein) y SIPs (small basic intrinsic protein). El objetivo de este trabajo fue estudiar y caracterizar acuaporinas de tonoplasto de Beta vulgaris. A partir de una colección completa de DNAc de raíz de remolacha se obtuvieron cuatro clones (Maria Karlsson,  departamento de Bioquímica de Plantas, Universidad de Lund, Lund, Suecia) que codifican para dos proteinas (BvTIPI y BvTIP4). Los análisis de secuencias confirman los sitios conservados en la proteína (seis dominios transmembrana y dominios NPA). Por otro lado los alineamientos de secuencias  aminoacidicas revelan una homologia de 73% entre BvTlPl y AtTIP1;3 y del 66% entre BvTIP4 y  tTIP4;l. Para comprobar su funcionalidad como canal de agua los genes de estas proteínas fueron subclonados en el vector T7TS que permite la expresión heteróloga en ovocitos de Xenopus. El RNA sintetizado in vitro fue inyectado en ovocitos y se siguieron los cambios de volumen luego de la aplicación de un gradiente hiposmótico. Como control positivo se utilizaron ovocitos inyectados con una acuaporina de actividad conocida, AtPIP2;3. BvTlPl mostró un valor alto de permeabilidad osmótica (Pf) que resultó ser significativamente mayor (75 +-7 *10-4 cm s-1) al de los ovocitos no inyectados utilizados como control negativo (5 +- 1 *10-4 cm s-1). De acuerdo a los resultados publicados en la literatura, las TlPs  presentan alta permeabilidad al agua, en cambio no hay datos disponibles hasta el momento acerca de las TIPs 4. El subclonado de BvTIP4 está en curso.