Identifiacion y caracterización de la acuaporina FaPIP1 presente en la membrana plasmática de la frutilla (Fragaria x ananassa)

P. MUT, C. BUSTAMANTE, K. ALLEVA, M. SUTKA, G.MARTÍNEZ, M CIVELLO Y G. AMODEO

Carlos Paz, Cordoba, Argentina

Congreso; XXXIV Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Biofísica; 2005

SAB

Introducción La Frutilla es un fruto del tipo agregado, no climatérico (es decir, carente del pico respiratorio característico y del aumento de la síntesis de etileno en la maduración). Las etapas de desarrollo y maduración son rápidas, determinando una muy corta ventana de comercialización postcosecha, por lo que resulta importante conocer cuáles son los mecanismos involucrados en estos procesos. Durante la maduración y desarrollo de los frutos, se evidencia una etapa de ablandamiento. Originalmente se consideró a la degradación de la pared celular como causa principal de este ablandamiento, hoy en día se piensa que la expansión celular es consecuencia además de la regulación entrada de agua a las células. Nuestro grupo de trabajo identificó una acuaporina (canal de agua) perteneciente al subtipo PIP1 de membrana plasmática (FaPIP1) cuya expresión en el fruto avala que el movimiento de agua puede ser considerado como una estrategia para estudiar los mecanismos involucrados en la maduración del fruto. Resultados El estudio del transporte de agua en frutilla se abordo desde dos niveles: nivel subcelular: mediante el uso de vesículas de membrana plasmática (FaPM) y nivel molecular: mediante el uso del mRNA de la FaPIP1. Nivel subcelular: ·          Se purificaron vesículas de membrana plasmática a partir de frutos maduros, mediante un sistema de dos fases de polímeros acuosos que las aisla por diferencia de cargas. ·          La fracción FaPM mostró un alto enriquecimiento (3.6 veces respecto de la fracción microsomal FaM). ·          En la preparación de vesículas se puede detectar por Western Blot con anticuerpos anti-PIP1 la presencia de acuaporinas. ·          Utilizando la técnica de stopped flow se estudiaron los cambios volumétricos de las vesículas en respuesta un shock osmótico (460 mOsm). Las vesículas mostraron alta permeabilidad al agua, compatible con el pasaje de agua a través de proteínas. ·          El transporte de agua no fue sensible a compuestos mercuriales. Nivel molecular: ·          La expresión de FaPIP1 en ovocitos de Xenopus muestra bajos valores de permeabilidad al agua para esa proteína. ·          El análisis de Northerm Blot reveló que FaPIP1 incrementa su expresión a lo largo de la maduración del fruto. Conclusión En el presente trabajo se demuestra la presencia de acuaporinas en la membrana plasmática del fruto maduro de las frutillas. El subtipo FaPIP1 mostró baja permeabilidad al agua como lo reportado para la mayoría de sus homologas cuando se la expresa en ovocitos de Xenopus. Sin embargo, los experimentos de Stopped Flow dan una alta permeabilidad al agua de las vesículas FaPM, sugiriendo la presencia de más de un subtipo de acuaporinas presentes. El aumento en la expresión del mRNA de la FaPIP1 a lo largo del desarrollo del fruto avala la posibilidad de su participación en la maduración del fruto.