Evaluación de un esquema de Secuenciación Multilocus como herramienta para tipificación de aislados de Trypanosoma cruzi

LAUTHIER JJ, MONJE RUMI MM, RAGONE PG, PÉREZ BRANDÁN CM, PADILLA AM, CARDOZO RM, UNCOS DA, RAMOS F, BASOMBRÍO MA, TIBAYRENC, M, DIOSQUE P

Chascomus, Buenos Aires, Argentina

Otro; XXII Reunión de la Sociedad Argentina de Protozoologia; 2007

Sociedad Argentina de Protozoología

Las técnicas de tipificación utilizadas para estudios epidemiológicos de T. cruzi, se basan en análisis visuales de patrones de bandas, que limitan la comparación de los resultados entre laboratorios, y muchas de ellas tienen escasa resolución. Es así que la técnica de secuenciación multilocus de fragmentos de genes metabólicos (MLST, Multilocus Sequence Typing), surge como una nueva y poderosa herramienta de tipificación de microorganismos, que permiten además analizar relaciones genéticas intraespecíficas. En el marco de un trabajo que tiene por objetivo desarrollar un esquema MLST para T. cruzi, se evaluaron tres genes de copia simple. Se diseñaron primers para amplificar fragmentos de entre 400 y 500 bp de cada uno de estos genes. Para evaluar estos primers se utilizaron 13 cepas clonadas, previamente caracterizadas por MLEE, pertenecientes a los linajes T. cruzi I, IId y IIe; y sobre 6 cepas de referencia más outgroup (T. cruzi marinkellei). Los primers amplificaron exitosamente los fragmentos esperados en todos los casos, los cuales fueron secuenciados, y posteriormente, se evaluó su utilidad para la incorporación al esquema MLST. En desarrollo. Los resultados obtenidos sugieren que estos fragmentos, en conjunto con fragmentos de 7 genes evaluados previamente, constituyen un esquema de tipificación con un alto poder discriminativo, y de particular utilidad para los estudios epidemiológicos que nuestro grupo lleva a cabo en áreas rurales de la provincia de Chaco.