La deleción monoalelica dirigida del gen CRT esta asociada a defectos en el crecimiento, la diferenciación y la resistencia a la lisis por complemento en Trypanosoma cruzi

FERNANDO J. SANCHEZ VALDEZ, MARIA PAOLA ZAGO, MIGUEL ANGEL BASOMBRIO; CECILIA PEREZ BRANDAN

Mar del Plata

Congreso; IX Congreso de Protozoologia y Enfermedades Parasitarias; 2011

Sociedad Argentina de Protozoologia

En Trypanosoma cruzi, Calreticulina (TcCRT) es una chaperona de union a calcio localizada principalmente en Reticulo Endoplasmico y translocada al sitio de la membrana plasmatica de emergencia del flagelo. Ensayos in vitro demostraron que TcCRT participa en la inhibicion de la formacion de C3/C5 convertasa y el complejo de ataque a la membrana, de esta forma TcCRT impide la activacion de la via clasica del Complemento. Ademas, TcCRT constituye un factor de virulencia de T. cruzi ya que la propia molecula y los anticuerpos anti-TcCRT generados favorecen la invasion y la infectividad del parasito. Con el objeto de determinar la importancia de TcCRT en el desarrollo y establecimiento de la infeccion in vivo generamos una mutante monoalelica crt/CRT en la cepa naturalmente atenuada TCC de T. cruzi mediante recombinacion homologa. Por otra parte, generamos parasitos de la cepa TCC sobreexpresando el gen TcCRT mediante transfeccion con el plasmido pTrex-CRT. Estudios in vitro mostraron que la mutacion inducida no altero la morfologia de los parasitos. Sin embargo, epimastigotes mutantes presentan una disminucion significativa en la tasa de crecimiento en cultivos axenicos (p=0.0448) y en la capacidad de metaciclogenesis con respecto a la cepa parental TCC wild type (p=0.0379). Por otro lado, ensayos de lisis mediada por Complemento utilizando suero humano normal fresco, revelaron que epimastigotes TCC crt/CRT poseen una susceptibilidad significativamente aumentada a la accion litica del Complemento (p= 0.0273) en comparacion con epimastigotes TCC wild type. Contrariamente, parasitos TCC sobre-expresando TcCRT demostraron ser resistentes a la lisis por Complemento con respecto a su contraparte wild type (p= 0.0180). En ensayos de virulencia in vivo observamos mediante PCR y hemocultivos que ratones nude y Balb/c infectados con la mutante crt/CRT presentarian cargas parasitarias menores en la etapa cronica de la infeccion con respecto a ratones infectados con parasitos TCC wild type. De la misma manera, mediante ELISA detectamos una reduccion de la produccion de anticuerpos en esta etapa de la enfermedad. Actualmente, estamos examinando la tasa de metaciclogenesis in vivo en vinchucas alimentadas artificialmente con el objeto de verificar el comportamiento observado in vitro. Del mismo modo, estamos llevando a cabo experimentos de inmunoprotecion mediante el empleo de parasitos mutantes en animales de experimentacion. Trabajo financiado por Agencia y CONICET.