Los acidos grasos unidos covalentemente a alfa hemolisina de E. coli, inducen cambios en la conformaciónde la misma.

V. HERLAX; L. BAKÁS

Villa Carlos Paz,Argentina

Congreso; XXXIV Reunión Anual de SAB; 2005

SAB

   Alfa hemolisina es una toxina proteica que ciertas cepas patógenas de E.coli secretan específicamente al medio. Esta demostrado que es un factor importante en la virulencia de esta bacteria en enfermedades como meningitis, septicemia, infecciones urogenitales (Cavalieri, et al. 1984).   La toxina activa puede causar la muerte de varios tipos celulares, células del sistema inmune del hospedador, células endoteliales, etc. (Menestrina, et al. 1995), (Coote 1996)    a-hemolisina se sintetiza por el operón hlyCABD como un precursor no tóxico, prohemolisina, la cual se activa en el citoplasma por un proceso post-traduccional. La maduración se lleva a cabo por la adición de ácidos grasos, vía uniones amida, a dos residuos internos específicos : las lisina K564 (KI) y K690 (KII). Esta activación esta dirigida por la cosintetizada HlyC, una aciltransferasa que utiliza la proteína transportadora de acilos (ACP), como dadora de los ácidos grasos ( mayoritariamente mirístico) ((Hardie, et al. 1991), (Hughes, et al. 1992),  (Ludwig, et al. 1996)). Esta maduración aumenta la hidrofobicidad de la proteína, pero no es necesaria para la exportación (Ludwig, et al. 1987), ni para la unión al Ca+2 (Ludwig, et al. 1996), ni para la formación de poro en membranas artificiales (Menestrina, et al. 1987).    En este trabajo realizamos experimentos para caracterizar las propiedades estructurales y químicas de la proteína acilada (Hly) y la no acilada (ProHly) con el objetivo de dilucidar la función que tienen los ácidos grasos en el mecanismo de acción de la toxina.    Los resultados obtenidos a partir de medidas de fluorescencia intrínseca de las proteínas en presencia de cloruro de guanidinio y digestión controlada con tripsina, demostraron que ProHly es mas estable que Hly en solución. Los  valores de n 19.6 y 38.5 y Kd 1.6 y 16.6 para ProHly y Hly respectivamente, obtenidos por  binding de  ANS a las proteínas, indican que existe un cambio en la conformación de la toxina a un estado mas desplegado en presencia de los ácidos grasos. La diferencia de 10 veces el valor de Kd, la mayor susceptibilidad a la tripsina y el gran número de moléculas de ANS que une Hly indicaría que este cambio conformacional expone regiones intrínsecamente desordenados, lo que explicaría el amplio espectro de células blanco de esta toxina. Referencias: 1. Cavalieri, S., G. A. Bohach and I. Synder. 1984 Microbiol. Rev. 48: 326-343. 2. Coote, J. G. 1996 Rev.Med.Microbiol. 7: 53-62. 3. Hardie, K., J. Issartel, E. Koronakis, C. Hughes and V. Koronakis. 1991 Mol.Microbiol. 5: 1669-1679. 4. Hughes, C., J. Issartel, K. Hardie, P. Standley, E. Koronakis and V. Koronakis. 1992 . FEMS Microbiol.Immunol. 105: 37-44. 5. Ludwig, A., F. García, S. Bauer, T. Jarchau, R. Benz, J. Hoppe and W. Goebel. 1996 J .Bacteriol. 178: 5422-5430. 6. Ludwig, A., M. Vogel and W. Goebel. 1987 . Mol Gen Genet. 206: 238-254. 7. Menestrina, G., N. Mackman, I. Holland, B. and S. Bhadki. 1987 . Biochem Biophys Acta. 905: 109-117. 8. Menestrina, G., M. Ropele, M. Dalla Serra, C. Pederzolli, H. Ferdinand, S. Pellet and R. Welch. 1995 Biochimica et biophysica Acta. 1238: 72-80.