Relación entre la actividad lítica de la toxina alfa- hemolisina de E. coli y el estado parcialmente desnaturalizado con la acilación de la proteína

V. HERLAX; L. BAKÁS

La Plata, Argentina

Jornada; II Jornadas de Bioquímica y Biología Molecular de Lípidos y Lipoproteínas; 2003

INIBIOLP

   Alfa hemolisina de E.coli, es una toxina de naturaleza proteíca que afecta diferentes células de mamíferos no solo a través de su actividad lítica, sino también a través de la liberación de mediadores inflamatorios. Es considerada el prototipo de una familia de proteínas denominadas RTX, la que se caracteriza por la presencia de repeticiones de un nonapéptido cuya secuencia consenso es GGXGXDXUX y de una secuencia C terminal implicada en la exportación de la proteína. La toxina activa se sintetiza a partir de un operón que contiene 4 genes en tandem HlyC,A,B,D. El gen estructural hlyA, da lugar a la síntesis de un precursor no tóxico de 1024 aminoácidos, denominado prohemolisina (ProHly), ya que es activado intracelularmente por una acilación dependiente de HlyC, por la adición de ácidos grasos vía uniones amida a residuos de lisina y con participación de la proteína transportadors de acilos como dador de ácidos grasos. La actividad lítica de la toxina es absolutamente dependiente de la acilación de la proteína, ya que si bien ProHly es capaz de unirse a bicapas lipídicas, no presenta actividad lítica.A ravés de estudios de fluorescencia intrínseca de la proteína y de desnaturalización química, fue posible comprobar que la acilación es responsable de inducir un estado parcialmente desnaturalizado en la forma activa, necesario para transformar a la forma soluble en una forma competente con el proceso de inserción en la membrana. Finalmente, a través de estudios de transferencia de energía la proteína unida a liposomas a liposomas que contenían un "quencher" fue posible demostrar que la irreversibilidad de la unión, paso necesario para que la lisis ocurra, es debido a la presencia de ácidos grasos en la forma activa.