Estudio de la respuesta de defensa inducida por un extracto derivado de un patógeno avirulento de Colletotrichum en la frutilla

CHALFOUN, NADIA REGINA; ARIAS, MARTA EUGENIA; SALAZAR, SERGIO MIGUEL; CASTAGNARO, ATILIO PEDRO; DIAZ RICCI, JUAN CARLOS

Tafí del Valle. Tucumán

Jornada; 22º Reunión de la Asociación de Biología de Tucumán; 2005

Asociación de Biología de Tucumán

Las plantas son constantemente atacadas por fitopatógenos “aspirantes” pero cuentan con numerosos mecanismos de defensa, que le permiten hacer frente a potenciales invasores. Cuando la planta reconoce en forma temprana al patógeno atacante, produce una activación rápida de mecanismos de defensa que bloquean la infección. Se dice que en este caso la interacción planta/ patógeno es de tipo incompatible porque no conduce a enfermedad y la cepa se define como avirulenta. Las plantas activan sus propios sistemas de defensa al reconocer moléculas elicitoras derivadas de un microorganismo patógeno o bien generadas durante la invasión. Estas señales dan lugar a una Respuesta de Hipersensibilidad (HR) que consiste en la muerte localizada de las células invadidas por el patógeno, asociada a un reforzamiento de la pared celular de las células afectadas, al mismo tiempo que se produce la acumulación rápida de numerosas proteínas y metabolitos, algunos con actividad antimicrobiana como las fitoalexinas que producen fluorescencia en el sitio de infección y luego en áreas alejadas de la planta. Esta respuesta sistémica normalmente les confiere una resistencia frente a una infección por un patovar virulento. El objetivo del presente trabajo fue analizar la ocurrencia de procesos asociados a la defensa producidos por acción de elicitores obtenidos de un patógeno fúngico avirulento Colletotrichum fragariae. Los experimentos se hicieron con plantas de la variedad comercial de frutilla: cv. Pájaro que fueron saneadas por cultivo in vitro de meristemas. El extracto con actividad elicitora se obtuvo a partir del sobrenadante de un cultivo líquido (en medio PG) en fase estacionaria de la cepa de C. fragariae  crecida bajo condiciones óptimas de cultivo. Se infiltraron con 20μl de elicitor en cuatro sitios de la superficie abaxial de 2 hojas por planta y se cosecharon a distintos tiempos. Se estudió engrosamiento diferencial de pared celular por tinción con safranina y tinción histoquímica de peroxidasas con DAB (diaminobenzidina). Las observaciones se realizaron bajo luz visible y UV. En paralelo se realizó un ensayo fitopatológico para evaluar la resistencia inducida contra al ataque de una cepa virulenta de C. acutatum. La tasa de severidad de la enfermedad (Disease Severity Rating: DSR) se evaluó en pecíolos según una escala de 1 (sin enfermedad) a 5 (máxima severidad). Resultados muestran que a partir de las 2 hs se observa producción de H2O2 en sitios cercanos y alejados al punto de inyección, asociado a un engrosamiento significativo de la pared celular de células del mesófilo en empalizada y de la epidermis abaxial. Por otro lado se observa en el punto de inyección la aparición gradual de compuestos fluorescentes acompañada de necrosis a partir de las 24 hs. Esto nos permite concluir que elicitores fúngicos de la respuesta de defensa contra la antracnosis en frutilla inducen en forma temprana múltiples respuestas de defensa locales que dan lugar a una protección sistémica de la planta cuando se la desafia a un patovar virulento de Colletotrichum.