En la búsqueda de determinantes estructurales del plegado de un péptido intrínsecamente desordenado

PABLO ROSI; ERNESTO A. ROMAN; FRANCISCO LUIS GONZALEZ FLECHA; JOSÉ MARÍA DELFINO; JAVIER SANTOS

La Plata, Provincia de Buenos Aires, Argentina.

Congreso; Reunion Anual de la Sociedad Argentina de Biofísica; 2008

Sociedad Argentina de Biofisica

<!-- /* Style Definitions */ p.MsoNormal, li.MsoNormal, div.MsoNormal {mso-style-parent:""; margin:0cm; margin-bottom:.0001pt; mso-pagination:widow-orphan; font-size:12.0pt; font-family:"Times New Roman"; mso-fareast-font-family:"Times New Roman";} a:link, span.MsoHyperlink {color:blue; text-decoration:underline; text-underline:single;} a:visited, span.MsoHyperlinkFollowed {color:purple; text-decoration:underline; text-underline:single;} @page Section1 {size:612.0pt 792.0pt; margin:70.85pt 3.0cm 70.85pt 3.0cm; mso-header-margin:36.0pt; mso-footer-margin:36.0pt; mso-paper-source:0;} div.Section1 {page:Section1;} --> La tiorredoxina de E. coli (TRX) es una proteína de 108 residuos, muy estable y con una topología compleja. Históricamente ha sido utilizada como modelo para el estudio de la estabilidad y el plegado. En nuestro laboratorio se ha determinado que la hélice C–terminal (péptido 94-108, LSKGQLKEFLDANLA) juega un papel central en la consolidación de la estructura final de la TRX (1). Estudios de dicroísmo circular (CD) del péptido 94-108 en solución acuosa (fosfato de sodio 2 mM, pH 7.0) mostraron un espectro compatible con la ausencia de estructura secundaria. La adición, tanto de trifluoroetanol (TFE, 20 % v/v) como dodecilsulfato sódico (SDS, 2.0-5.0 mM), indujo bandas dicroicas compatibles con la estabilización de estructura helicoidal. En este trabajo nos preguntamos qué características de la secuencia del péptido 94-108 contribuyen a la estabilidad de su estructura secundaria. Para esto se utilizó SDS como inductor de estructura y se prepararon mutantes puntuales del péptido 94-108  en las que fue reemplazado cada residuo de leucina por alanina: L94A, L99A, L103A y L107A. El análisis de la elipticidad a 220 nm en función de concentraciones submicelares de SDS (0.0 – 5.0 mM) mostró que todas las variantes presentan una estabilización de estructura helicoidal en concentraciones de SDS entre 3 y 5 mM. Sin embargo, el punto medio de la transición conformacional para las variantes L99A y L103A se encuentra desplazado a concentraciones mayores de SDS, comparado con las observadas para las variantes L94A y L107A. Todas las transiciones conformacionales observadas fueron a concentraciones mayores que la observada para el péptido wild type (1.5 mM) y como en este péptido fueron reversibles, alcanzando el equilibrio durante el mezclado. Experimentos de electroforesis capilar en presencia del SDS (en el mismo rango de concentraciones) demostraron que este detergente se une a los péptidos, y que en consecuencia, el cambio conformacional podría estar mediado por la interacción directa del SDS con el péptido. Los tiempos de retención para cada péptido resultaron significativamente distintos, mostrando menor movilidad electroforética a concentraciones mayores de SDS. En conjunto, estos resultados sugieren que cada péptido estaría uniendo cantidades distintas de SDS, así como también que la tendencia a formar estructura helicoidal podría estar determinada primariamente por el fenómeno de unión.   (1) Biochemistry. 2007 May 1;46(17):5148-59 Agradecimientos: Dra. Nora Vizioli y Dr. Mariano González Lebrero.  Con financiamiento de ANPCyT, CONICET, UNQ y UBACyT.