INVESTIGADORES
ROMAN Ernesto Andres
congresos y reuniones científicas
Título:
Desplegado de una proteína termófila de membrana con cloruro de guanidinio
Autor/es:
ERNESTO A. ROMAN; JOSÉ MARTÍN ARGUELLO; FRANCISCO LUIS GONZALEZ FLECHA
Lugar:
La Plata, Provincia de Buenos Aires, Argentina.
Reunión:
Congreso; Reunion Anual de la Sociedad Argentina de Biofísica; 2008
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Biofisica
Resumen:
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El plegado y estabilidad son fundamentales para la actividad
biologica de las proteínas. Sin embargo, los factores que influyen en la
estabilidad no están del todo entendidos. En este trabajo caracterizamos los
estados nativo y desplegado de CopA, una proteína termófila de membrana.
Realizamos experimentos de CD en los que damos evidencias
que la estructura alcanzada con GdnHCl en altas concentraciones es compatible
con la de ovillo al azar. La fluorescencia intrínseca de CopA con
concentraciones hasta 7.5 M de GdnHCl disminuye con un corrimiento del centro
de masa desde 342 nm a 350 nm. Este valor es compatible con el del trp libre en
una solución acuosa de GdnHCl. Experimentos de apagamiento de fluorescencia con
Ioduro de Sodio (NaI) muestran que la proteína nativa tiene una fracción
accesible de trp al solvente de 0.48±0.02. En presencia de GdnHCl muestran que
la proteína desplegada tiene una fracción accesible de 0.98±0.02. Por otro
lado, se tituló CopA con concentraciones crecientes de 1 amino naftaleno 8
sulfónico (ANS) para evaluar la persistencia de regiones hidrofóbicas
estructuradas en la proteína. Se observó que la unión de ANS en relación 10:1
con respecto a la proteína disminuye a medida que aumenta la concentración de
GdnHCl. La transición observada puede superponerse a la que vemos en dicroismo
circular y fluorescencia, sugiriendo la observación del mismo fenómeno.
El ΔG de desplegamiento caculado fue de 3.07±0.67. La
variación de este valor con la temperatura fue muy leve, hasta 70 grados. La caracterización
ulterior de este fenómeno dará información interesante acerca de la estabilidad
de estas proteínas a temperaturas elevadas.
Por otro lado, tanto la actividad ATPasa como la fosfatasa
de CopA cae en un rango menor de GdnHCl al observado para las transiciones
estructurales, sugiriendo la existencia de un intermediario inactivo.
Resumiendo, en este trabajo mostramos que la
desnaturalización de CopA con GdnHCl involucra toda la estructura de la
proteína, y no sólo sus dominios solubles. Además se refuerza la evidencia de
la un intermediario inactivo a bajas concentraciones de desnaturalizante. Se
intentará profundizar sobre el efecto de la temperatura en el desplegamiento
con GdnHCl.
