Desarrollo y evaluación de nuevos inmunógenos para la prevención del virus de la bursitis infecciosa de las aves

ROMANUTTI CARINA; IBAÑEZ LORENA ITATÍ; RUSPI DANIEL; GALLO CALDERON MARINA; MATTION NORA; ZANETTI FLAVIA

Rosario, Santa Fe

Congreso; XXIII congreso Latinoamericano de Microbiología; 2016

La bursitis infecciosa (IBD) esuna enfermedad aguda muy contagiosa que causa inmunosupresión y mortalidad enpollos jóvenes, generando importantes pérdidas económicas en la industriaavícola. Su agente etiológico, el virus de la bursitis infecciosa (IBDV),produce destrucción de los linfocitos B que maduran en la bolsa de Fabricio delas aves. El control de la enfermedad se realiza principalmente poradministración de vacunas basadas en cepas virales atenuadas, que si bieninducen una respuesta de anticuerpos neutralizantes generan lesiones en labolsa interfiriendo en la respuesta a otras vacunas y/o favoreciendoinfecciones por patógenos. En este contexto el desarrollo de nuevas vacunasseguras y efectivas resulta prioritario para la prevención de IBDV. El objetivode este trabajo fue obtener y evaluar un inmunógeno basado en ADN para laexpresión in vivo de la proteína VP2de IBDV, antígeno inductor de anticuerpos neutralizantes en el hospedador. Paraello primero se extrajo el ARN viral a partir de una alícuota de una vacunacomercial de IBDV del laboratorio Nobilis (cepa D78), utilizando el reactivo deTrizol (Invitrogen). Luego se realizó la amplificación de la secuencianucleotídica codificante de la proteína VP2 mediante una reacción de RT-PCR conel kit (One Step RT-PCR, QIAGEN)y oligonucleótidos específicos. El producto de amplificación, de 1300 pb, seclonó en el vector comercial pGEMT-Easy (Promega) y luego se subclonó enlos sitios NheI y NotI del plásmido pXL gentilmente cedido por elDr. Saelens. En el vector obtenido, denominado pXL-VP2, se corroboró laidentidad del inserto por secuenciación y la expresión de la proteínaheteróloga mediante ensayos de Western blot utilizando extractos decélulas transfectadas con este plásmido y un suero de conejo con reactividadespecífica. En una primera instancia, la capacidad inmunogénica de pXL-VP2 seevaluó en el modelo murino. Para ello, grupos de cuatro ratones (cepa BALB/c)se inmunizaron cada 21 días por vía intramuscular con tres dosis de 100 ug delplásmido pXL-VP2 o pXL (grupo control). A lo largo del experimento serealizaron sangrías exploratorias. Los sueros obtenidos de un mismo grupoexperimental y sangría se agruparon en pools para analizar la presenciade anticuerpos neutralizantes de IBDV por la técnica de dilución límite. Tantolos sueros preinmunes como los de los ratones vacunados con el plásmido pXL nopresentaron actividad neutralizante específica a diferencia de los sueros delos ratones inmunizados con pXL-VP2 cuyos títulos neutralizantes de IBDV fueronde 4, 128 y 1024 luego de una, dos y tres dosis, respectivamente.    En este trabajo se obtuvo,caracterizó y evaluó la capacidad inmunogénica de una vacuna a ADN para la expresiónin vivo de la proteína VP2 de IBDV. Afuturo se evaluará la inmunogenicidad y la eficacia de pXL-VP2 mediante vacunacióny desafío de pollos libres de patógenos específicos.