EL RELOJ BIOLÓGICO Y SU INFLUENCIA EN EL METABOLISMO DE VUELO DEL VECTOR DE LA ENFERMEDAD DE CHAGAS TRIATOMA INFESTANS

STROPPA MM; GARCÍA BA

Jornada; XXII Jornadas Científicas Sociedad de Biología de Córdoba; 2019

Dentro del ciclo de vida de Triatoma infestans numerosos procesos biológicos están controlados por el reloj circadiano. Para investigar la influencia del reloj biológico en la dispersión a través del vuelo, analizamos el perfil diario de expresión y actividad de las isoformas de glicerol-3-fosfato deshidrogenasa (GPDH), enzima clave del metabolismo de vuelo. Por otra parte, abordamos el estudio del reloj circadiano mediante la identificación de las secuencias de los genes reloj period (per) y timeless (tim) en Rhodnius prolixus e investigamos en T. infestans el perfil diario de expresión de ambos genes a nivel transcripcional por RT-PCR en tejido nervioso de adultos, bajo condiciones de fotoperiodo (LO) y luz constante (LL). Además, se investigó la presencia del transcripto per en diferentes tejidos de adultos y en tejido nervioso del estadio ninfal V de T. infestans. Mediante la determinación de actividad enzimática total de GPDH, la técnica de electroforesis no desnaturalizante en poliacrilamida con revelado por actividad enzimática específica y RT-PCR, se comprobó que en músculo de vuelo de T. infestans sometidos a diferentes condiciones de fotoperiodo, la expresión de las isoformas de GPDH presentan variaciones rítmicas y diferenciadas según el sexo. La isoforma GPDH-1, involucrada en el metabolismo energético del vuelo, mostró un perfil de expresión rítmico y sincronizado en oscuridad constante, lo que sugiere una regulación endógena. Sin embargo, para la isoforma GPDH-2, implicada en el metabolismo intermedio de lípidos, un factor externo como la alternancia entre luz y oscuridad parecería ser necesario para la sincronización entre transcripción y actividad. Las regiones codificantes de per y tim en R. prolixus mostraron alta homología respecto a otras especies de insectos y presentaron dominios de importancia funcional. En el grupo LO, la expresión de per y tim a nivel transcripcional mostró un pico al atardecer, que concuerda con lo descripto en Drosophila melanogaster, y es compatible con la oscilación diaria de las proteínas PER Y TIM antes observada en R. prolixus. En el grupo LL no se observaron cambios diarios en los niveles de expresión, lo que evidenciaría la acción disruptiva de la luz sobre el ritmo de transcripción. Por otra parte, la presencia del transcripto per en diversos tejidos de individuos adultos y en tejido nervioso de ninfas de estadio V, indicarían actividad del reloj central en dos etapas del desarrollo evolutivo y la probable existencia de relojes periféricos.