Purificación de alfa-glicerofosfato dehidrogenasa de Triatoma infestans.

. SCARAFFIA, P., STROPPA, M., CARRIAZO, C., GEREZ DE BURGOS, N.M.

Córdoba

Jornada; Terceras Jornadas de Investigación Científica de la Facultad de Ciencias Médicas; 2002

Facultad de Ciencias Médicas - UNC

Cátedra de Bioquímica y Biología Molecular. Facultad de Ciencias Médicas, U.N.C. y Cátedra de Química Biológica. U.N.La Rioja. ngerez @biomed.fcm.unc.edu.ar En nuestro laboratorio hemos demostrado que, en la última etapa de la metamorfosis, en los músculos de vuelo de  Triatoma infestans y Dipetalogaster maximus se incrementa más de 30 veces la actividad específica de a-glicerofosfato dehidrogenasa (GPDH) y se producen cambios en su trazado electroforético. Según estos resultados la GPDH tendría influencia en la capacidad de vuelo y por ende en la dispersión de los insectos. Con el fin de estudiar sus propiedades catalíticas se purificó la GPDH  de los músculos de vuelo. Se homogeneizaron 1,5 g de músculo de vuelo de T. infestans macho adulto con 4,5 mL de buffer Tris-HCl 0,01 M, pH 7,6 en un disrruptor de tejidos Ultra-Turrax  T 25 por 3 min. Se centrifugó la suspensión 40 min a 20.000g a 4°C. Se aplicó el sobrenadante  sobre una columna de DEAE celulosa de 1,3 x 15 cm equilibrada con el buffer de ruptura. Se eluyó con el mismo buffer con un gradiente discontinuo de KCl de 1 a 100 mM. Las fracciones con actividad GPDH fueron concentradas  por precipitación con  (NH4)2 SO4 saturado al 70 %, centrifugadas y sembradas sobre columna de Sephacryl S-300, se equilibró la columna y se eluyó con buffer Tris HCl 0,01 M, pH 7,6. Las fracciones con actividad GPDH fueron mezcladas, concentradas y desaladas con un concentrador Centripep. Mediante electroforesis en SDS-PAGE y tinción para proteínas se obtuvo una banda de proteína de masa molecular similar a la de otras GPDH (37.000).