Estudios Moleculares de Glicerol–3–fosfato deshidrogenasa en Triatoma infestans

STROPPA, M. M., SORIA N., CARRIAZO C., GEREZ DE BURGOS, N. M.

Huerta Grande - Córdoba

Otro; Reunión Anual de Sociedad Argentina de Protozoología; 2006

Sociedad Argentina de Protozoología

Triatoma infestans (T. infestans), vector de la enfermedad de Chagas, adquiere alas y la habilidad de volar después de la última muda, del quinto estadio ninfal al adulto.  La habilidad de volar es importante en la dispersión.  En estudios previos, en nuestro laboratorio, fue demostrado que la enzima glicerol-3-fosfato deshidrogenase (GPDH), involucrada en la lanzadera glicerolfosfato, incrementa su actividad 30 veces en el músculo torácico de adultos.  Los músculos de los adultos  tendrían mayor actividad glicolítica y respiratoria para sustentar el vuelo.  Estudios electroforéticos del músculo torácico mostraron la existencia de dos isoformas de GPDH en T. infestans con expresión diferencial en adultos y ninfas. El objetivo de este trabajo es comenzar con los estudios moleculares de  GPDH en T. infestans.  En  músculo de tórax de adultos de T. infestans de 1 a 3 días pos muda, se logró amplificar un fragmento de 200 pb correspondiente a GPDH. La técnica utilizada fue RT-PCR con primers degenerados, empleando Apis mellifera y Drosophila melanogaster y primers específicos como controles positivos. El fragmento amplificado en T. infestans fue clonado y secuenciado. La identidad y homología de la secuencia con respecto a los cDNAs y las proteínas de GPDH de otras especies permitieron afirmar que la secuencia encontrada corresponde a la enzima. A partir de la secuencia conocida de GPDH para T. infestans se diseñaron primers específicos para realizar ensayos de RACE-PCR 3´ y 5´.  Se logró amplificar un fragmento de aproximadamente 500 pb con la RACE-PCR 3´.  El fragmento clonado y secuenciado corresponde a la secuencia completa hacia el extremo 3´ del cDNA de la isoforma presente en músculo de T. infestans adultos.