EFECTO DEL SILENCIAMIENTO DEL GEN RELOJ PERIOD SOBRE LAS VARIACIONES DIARIAS DE EXPRESIÓN DE ESTE GEN EN EL VECTOR DE LA ENFERMEDAD DE CHAGAS Triatoma infestans

CÓRDOBA LE; GARCIA BA; STROPPA MM

Río Cuarto, Prov. de Córdoba.

Jornada; XXV Jornadas Científicas organizadas por la Sociedad de Biología de Córdoba; 2022

Triatoma infestans (Hemiptera, Reduviidae, Triatominae), principal vector de la enfermedad de Chagas en América del Sur, muestra ritmos diarios en su comportamiento, fisiología, actividad metabólica y expresión génica. Estos ritmos están controlados por los genes que componen el reloj biológico. La interferencia por ARN es un mecanismo de silenciamiento génico subsiguiente a la transcripción que permite interrumpir la función de genes específicos en un amplio rango de organismos. Con el propósito de estudiar el efecto del silenciamiento del gen reloj period (per) en la expresión a nivel transcripcional de este gen en tejido nervioso (cabezas) de individuos adultos de T. infestan, se utilizaron protocolos de silenciamiento con ARN de interferencia (ARNi) con dos esquemas de alimentación diferentes y se analizó el efecto del silenciamiento sobre el perfil diario de expresión del gen per. Para ello, se obtuvo ARNi del gen per y del gen control β-Lactamasa (β-Lac) y se suministraron por microinyección en ejemplares de T. infestans. Para analizar el efecto del silenciamiento sobre el perfil diario de expresión del gen per se realizaron disecciones cada 6 horas durante un período de 24 horas y la hora del día fue expresada en Zeitgeber Time (ZT), definiendo a ZT12 como el momento en que la luz se apaga y ZT0 como el final de la transición entre la oscuridad y la luz. Posterior al tratamiento, en cada grupo se procedió a determinar la expresión del gen reloj per a partir de ARN total extraído de pooles de cabezas, mediante la técnica de Retrotranscripción y PCR en Tiempo Real (RT-qPCR). El silenciamiento del gen per en machos y hembras T. infestans mostró una disminución significativa en sus niveles de expresión a nivel transcripcional, observándose una reducción de aproximadamente la mitad en el grupo de insectos inyectados con el ARNi del gen per con respecto a los niveles de expresión hallados en los grupos control (no inyectados e inyectados con el ARNi para el gen β-Lac). Los resultados obtenidos permitieron establecer que el silenciamiento del gen per fue efectivo tanto en machos como en hembras, sin diferencias significativas entre ellos, y no se ve afectado por los esquemas de alimentación utilizados en los protocolos de interferencia. Por otra parte, el silenciamiento del gen per afectó el perfil de expresión diario reduciendo a la mitad su expresión en todos los ZT analizados y no se observaron las variaciones diarias características en la expresión a nivel transcripcional que presenta este gen reloj.