Arqueosomas para el delivery oral de la enzima superoxido dismutasa

PRISCILA SCHILRREFF; YAMILA R. SIMIONI; EDER L. ROMERO; MARÍA J. MORILLA

Seminario; Seminario Interno de la Cátedra de Biotecnología-NANOBIOTEC, FFyB, UBA; 2018

En este trabajo se incorporó la enzima anti-oxidante superóxido dismutasa (SOD) en nanovesículas super-estables preparadas con arqueolípidos extraídos del microorganismo hiperhalofilo no alcalifilico Halorubrum tebenquichense (ARC). SOD posee alta actividad scavenger de especies reactivas de oxígeno (ROS). Es por esto que existe un gran interés en su uso como agente terapéutico en diversas enfermedades asociadas al estrés oxidativo como las enfermedades intestinales inflamatorias crónicas. Sin embargo, hoy en día las aplicaciones clínicas de SOD son muy limitadas debido a su inestabilidad. Por otro lado, los ARC poseen mayor resistencia frente a los ataques hidrolíticos, oxidación y lipólisis, a diferencia de las vesículas preparadas con fosfolípidos, denominados liposomas (LIPO). En este contexto, los ARC podrían servir como sistema de delivery oral de SOD ya que pueden proveer protección a la proteólisis durante el transito gastrointestinal. Se prepararon ARC por un método sencillo, rápido y de fácil escalado que constó únicamente de dos etapas: hidratación de la película lipídica y extrusión. Se obtuvieron ARC de tamaño nanométrico (240 ± 8,9 nm), monodispersos (índice de polidispersidad 0,237 ± 0,02) y un potencial Z negativo (-34,34 ± 1,39 mV). Se evaluó la estabilidad de ARC-SOD luego de exponerlos a un proceso de digestión simulada. La actividad antioxidante y antiinflamatoria sobre macrófagos estimulados con H2O2 o lipopolisacáridos (LPS) se determinó por el método de MTT y midiendo los niveles de IL-6 y TNF-α, respectivamente. Los niveles intracelulares de ROS se identificaron utilizando DCFDA y citometría de flujo. La efectividad de los ARC-SOD se comparó con LIPO a los que se incorporó SOD (LIPO-SOD). A diferencia de SOD y LIPO-SOD, los ARC-SOD suprimieron los niveles de IL-6 y TNF-α y la producción de ROS en células fagocíticas estimuladas con LPS. Además, luego de someterlos a un proceso de digestión simulada, el tamaño y la polidipersidad de los LIPO-SOD se perdió, mientras que los ARC conservaron sus parámetros originales. A diferencia de SOD y LIPO-SOD, ARC-SOD puedo revertir por completo el efecto oxidativo del H2O2 luego de 5h.En conclusión, la incorporación de SOD en arqueosomas le confirió a SOD una mayor estabilidad y un mayor potencial terapéutico de las enfermedades inflamatorias intestinales.