Sensor inmunomagnético de electrodos de láminas impresas de grafito (SPGE) aplicado a la determinación de Botrytis cinerea en frutas de pepita

MARTÍN A. FERNÁNDEZ BALDO; GERMÁN A. MESSINA; JULIO RABA; MARÍA I. SANZ

Bahía Blanca, Provincia de Buenos Aires

Congreso; V Congreso Argentino de Química Analítica; 2009

Asociación Argentina de Químicos Analíticos, Universidad Nacional del Sur

SENSOR INMUNOMAGNÉTICO DE ELECTRODOS DE LÁMINAS IMPRESAS DE GRAFITO (SPGE) APLICADO A LA DETERMINACIÓN DE Botrytis cinerea EN FRUTAS DE PEPITAMartín A. Fernández Baldo, Germán A. Messina, Julio Raba, María I. SanzINQUISAL-CONICET, Facultad de Química, Bioquímica y Farmacia, Universidad Nacional de San Luis, Chacabuco y Pedernera 5700, San Luis, Argentina. E-mail: mbaldo@unsl.edu.arBotrytis cinerea es un hongo fitopatógeno que produce una enfermedad denominada podredumbre gris afectando cultivos de importancia económica [1]. Frecuentemente se presenta como infección latente (fruta aparentemente sana) pudiendo deteriorarse repentinamente, debido a la evolución de la misma, apareciendo los síntomas visibles de la enfermedad [1]. También es difícil de controlarlo con fungicidas porque es genéticamente variable y ha desarrollado cepas resistentes a muchos productos [2]. Además, existen presiones de los consumidores a reducir estos productos en la cadena alimentaria y el medio ambiente [3]. Por estas razones, existe un mayor interés en desarrollar alternativas distintas a los fungicidas para la determinación y el control de la enfermedad.En el presente trabajo se desarrolló un sensor inmunomagnético para determinar el hongo en frutas de pepita como manzanas rojas, uvas de mesa y peras. La detección de B. cinerea se realizó mediante un inmunoensayo competitivo indirecto, donde antígenos purificados del hongo fueron inmovilizados sobre microesferas magnéticas modificadas con grupos 3-aminopropilos [4] y manipuladas por imanes. Los antígenos presentes en la muestra compiten inmunológicamente, por un anticuerpo anti B. cinerea IgG de ratón, con los antígenos purificados inmovilizados, el cual es detectado mediante un segundo anticuerpo anti-IgG de ratón marcado con la enzima peroxidasa, la que, en presencia de peróxido de hidrógeno, cataliza la oxidación de 4-ter-butil-catecol a 4-terbutil-ortoquinona. Esta última es reducida electroquímicamente en la superficie del SPCE a -0,15 V. La corriente medida es inversamente proporcional a la concentración de antígeno presente en la muestra.El sensor desarrollado mostró elevada sensibilidad y menores límites de detección que los métodos de ELISA desarrollados hasta el momento [5,6], lo cual demuestra su potencial para cuantificar B. cinerea en frutas de pepita, pudiendo además ser de fácil aplicación en la Industria Agroalimentaria para el control de calidad fitosanitario.REFERENCIAS[1] Coley-Smith J. R., Verhoeff K., Jarvis W. R., The Biology of Botrytis, Academic Press, NewYork,(1980) 318.[2] Staples R., Mayer A., FEMS Microbiol. Lett. 134 (1995) 1.[3] Hileman B., Chem. Eng. News 71 (1993) 3.[4] Hassen W. M., Chaix C., Abdelghani A., Bessueille F., Leonard D., Jaffrezic-Renault N., Sensors andActuators B 134 (2008) 755.[5] Instruction Manual for SAPS ELISA kit for Botrytis (Student Guide), Cambridge University BotanicGarden, Cambridge, England, 2000.[6] Meyer U. M., Spotts R. A., Dewey F. M., Plant Dis. 84 (2000) 1099.