Expresión transiente vía agroinfección de la región codificante de la cápside proteica (CP) del Plum pox virus, purificación y utilización como reactivo de diagnóstico.

DEBAT, H. J.; GRABIELE, M.; DALZOTTO, A.; LÓPEZ LAMBERTINI, P.; DUCASSE, D. A

Pergamino, Buenos Aires

Congreso; XXXVI Congreso Argentino de Genética.; 2007

Sociedad Argentina de Genética.

Plum pox virus(PPV) es el potyvirus causal de la Sharka, una enfermedad que produce drásticas perdidas en frutales de carozo. Recientemente se han registrado focos en Argentina por lo que se ha intensificado su diagnóstico. Para ello, es indispensable contar con PPV como control(+) con los riesgos que implica el uso de un agente infeccioso cuarentenario. Por esta razón se decidió modificar un vector viral agroinfiltrable del Tobacco mosaic virus(TMV) para la expresión de la CP-PPV con cola de histidina(His-tag), bajo el promotor de la CP-TMV. Además, se desarrolló un vector de transformación binaria con la secuencia de la CP-PPV-His-tag entre el promotor 35SCaMV con dos enhancer de transcripción más el enhancer de traducción TMV-Ω, y el terminador NOS. Ambas construcciones fueron agroinfiltradas en Nicotiana benthamiana y se evaluó, mediante DAS-ELISA, SDS-PAGE-Coomassie Blue y Western blot, la expresión transiente heteróloga de CP-PPV. Se comprobó la utilidad de la CP-PPV como control(+) habiéndose iniciando trabajos de generación de antisueros. Se obtuvieron resultados positivos en las pruebas serológicas y en la purificación de la CP-PPV-His-tag. Este sistema es muy eficiente por la  alta replicación y movimiento del vector viral, la alta infectividad de Agrobacterium, alto nivel de expresión y rendimiento relativo, bajo costo de producción por plantas y expresión en plantas maduras evitando problemas de toxicidad o potenciales de desarrollo. No requiere modificación genética estable de plantas, por lo que es mucho mas rápido y biológicamente seguro por la posibilidad de contención y ambiente reducido requerido para todo el proceso.