La bradiquinina favorece la asociación de las células del túbulo colector para formar colonias migratorias

GUAYTIMA EDITH; BRANDAN YAMILA; VALLS JERONIMO; STERIN-SPEZIALE NORMA B; MARQUEZ MG

La Rioja

Jornada; II JORNADAS DE DIVULGACION CIENTIFICA Y ACADEMICA, UNIVERSIDAD NACIONAL DE LA RIOJA; 2017

Universidad Nacional de La Rioja

Durante la nefrogénesis, la síntesis de bradiquinina (BK) aparece muy temprano, la actividad de la enzima que la degrada es muy baja, y la expresión del ARNm para su receptor B2 (RB2) es mucho mayor en el riñón en desarrollo que en el adulto. Esto sugiere que la BK desempeña un rol importante durante la nefrogénesis. Sin embargo, aún no se conocen los mecanismos celulares involucrados. El objetivo del trabajo fue investigar el rol de la BK en el desarrollo de la papila renal, utilizando como modelo de estudio cultivos primarios de células de túbulo colector (TC) de papila renal de ratas neonatas, puesto que en la rata, el riñón completa su desarrollo después del nacimiento. Para ello, las células se estimularon con BK en presencia o en ausencia de un antagonista del RB2, HOE-140, o de un inhibidor de la enzima fosfatidilinositol 3-quinasa (PI3K), LY294002. El análisis de las células tratadas con BK reveló la formación de un córtex continuo de filamentos de actina alrededor de la colonia, y la presencia de bordes ondulatorios o ruffles de membrana en las células de la periferia. Los experimentos realizados en tiempo real mostraron un aumento en la velocidad de formación de ruffles, así como la adquisición de un mayor nivel de compactación celular, reflejado por la disminución del área total de las colonias. El pre-tratamiento con HOE-140 afectó la adhesión célula-célula inducida por BK y la formación de ruffles. El análisis conjunto de imágenes de inmunofluorescencia y de los experimentos en tiempo real en presencia de LY294002, demostró la participación de PI3K en la asociación célula-célula, y en la formación de estructuras migratorias inducidas por BK. El análisis por inmunoblot demostró que la activación de PI3K mediada por BK provoca la activación de su efector ?corriente abajo? Akt, al incrementar su forma fosforilada (Akt-P), hecho que ocurre solo en ausencia de HOE-140, y de LY294002. Esta situación se reflejó en las imágenes de inmunofluorescencia, donde se observó una mayor intensidad de marcación de Akt-P, y de Rac1, un conocido efector ?corriente abajo? de PI3K que media la formación de lamelipodios. En conclusión, los resultados ofrecen nuevas evidencias experimentales del rol de la BK durante el desarrollo postnatal del riñón, a través de su unión al RB2 y posterior activación de la vía PI3K/Akt y PI3K/Rac1, mecanismos que favorecerían la migración colectiva de las células.