Las proteínas Rab 5 y Rab 11 participan en el tráfico de vinculina en células de tubulo colector de papila renal

MARÍA GABRIELA MÁRQUEZ; GUAYTIMA EDITH; BRANDAN YAMILA; MARIA BELEN DE LA VEGA; FAVALE NICOLAS; LUCILA GISELA PESCIO; NORMA STERIN-SPEZIALE

La Rioja

Jornada; JORNADAS CIENTÍFICAS DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE LA RIOJA 2011; 2011

UNIVERSIDAD NACIONAL DE LA RIOJA

La vinculina es una proteína que forma parte de estructuras que mantienen unidas las células a la matriz extracelular como los contactos focales (CF), y de estructuras que unen las células entre sí como las uniones adherentes. Los CF son estructuras dinámicas, puesto que se arman y se desarman. Trabajos previos de nuestro laboratorio demostraron que en células de túbulo colector de papila renal, la hormona intrarenal BK induce una reestructuración del CF mediante la disipación de vinculina, concomitantemente con la aparición de vesículas citosólicas conteniendo vinculina, y fosfatidilinositol-4,5-difosfato. El objetivo de este trabajo fue estudiar estas vesículas con mayor profundidad. Para ello incubamos células de túbulo colector de papila renal de rata con BK 1µM durante 1, 5 y 10 minutos, y aislamos las vesículas por métodos inmunomagnéticos. Mediante análisis por Western blot comprobamos que además de vinculina, las vesículas expresan el receptor para transferrina (marcador del compartimiento de reciclaje), Rab5 y Rab 11. La función de las proteínas Rab es el direccionamiento de vesículas en el citosol hacia la membrana diana apropiada. Paralelamente estudiamos por inmunofluorescencia y microscopia confocal, la colocalización entre vinculina y Rab5 ? proteína que se localiza en endosomas tempranos, y Rab 11- que media el reciclado de vesículas endocíticas. Observamos que vinculina colocaliza con Rab5 en la región perinuclear y marginal de células tratadas y no tratadas con BK. Con Rab 11, lo hace en ambas zonas en células tratadas, y en la zona perinuclear de células no tratadas con BK. De esta manera comprobamos que al menos una parte de la vinculina que no forma parte de los CF, se localiza en el compartimiento de reciclaje. También observamos que la reaparición de CF conteniendo vinculina que ocurre a los 10 min de estimulación con BK, depende de la integridad de los filamentos de actina y de los microtúbulos. Estos resultados sugieren que la modulación de la formación de estas vesículas podría representar un mecanismo fisiológico para reutilizar la vinculina internalizada para formar nuevos CF en las células de túbulo colector de papila renal.