La bradiquinina induce la formación de vesículas conteniendo una proteína que forma parte de estructuras de adhesión celular

MARÍA GABRIELA MÁRQUEZ

La Rioja

Encuentro; II Encuentro Regional de Farmacia y Bioquímica, Universidad Nacional de La Rioja; 2012

UNIVERSIDAD NACIONAL DE LA RIOJA

Previamente demostramos que la hormona intrarrenal bradiquinina (BK) induce una reestructuración de los contactos focales (CF) - estructuras que mantienen unidas las células a la matriz extracelular- movilizando vinculina por un mecanismo que involucra la hidrólisis de fosfatidilinositol-4,5-difosfato (PIP2). Esto ocurre con la aparición simultánea en el citosol de vesículas conteniendo vinculina, PIP2 y marcadores del compartimiento de reciclaje endosomal. Nuestro objetivo actual fue caracterizar bioquímicamente estas vesículas estudiando la naturaleza de la asociación de vinculina, su orientación, y la composición lipídica de la membrana de las mismas. Utilizamos la fracción microsomal (FM) de células del túbulo colector de papila renal de ratas pretratados con BK. Para analizar la naturaleza de la asociación de vinculina con la membrana, incubamos alícuotas de FM con soluciones de fuerza iónica creciente (KCl), de pH alcalino (Na2CO3, pH 10), y con solución acuosa de Tritón X-114. La orientación en la membrana se realizó con el ensayo de resistencia a la hidrólisis por proteasa (tripsina) en ausencia y presencia de Tritón X-100. Se analizó la presencia de vinculina por Western blot. El análisis de la composición fosfolipídica de las membranas se realizó por cromatografía en capa delgada (TLC) a partir de vesículas aisladas de la FM por métodos inmunomagnéticos. Observamos que a mayor fuerza iónica y alcalinidad, mayor es la cantidad de vinculina extraída de las vesículas, y se ubica en la fase acuosa frente al tratamiento con Tritón X-114. Fue completamente degradada por acción de tripsina, incluso en ausencia de Tritón X-100. La TLC reveló la presencia de fosfatidilcolina y esfingomielina en las membranas de las vesículas. Sobre la base de estos resultados concluimos que la vinculina cuando no forma parte de los CF, se inserta en la membrana de vesículas que pertenecen al compartimiento de reciclaje en forma periférica, probablemente por interacciones electrostáticas, y orientada hacia el citosol. La formación de estas vesículas podría representar un mecanismo fisiológico por el cual la célula reutiliza el pool citosólico de vinculina para la formación de estructuras de adhesión como lo son los CF.