N-ACETILGLUCOSAMINIDASA (NAG) EN ESPERMATOZOIDES HUMANOS: LOCALIZACIÓN EN MEMBRANA PLASMÁTICA Y POSIBLE ORIGEN EPIDIDIMARIO.

MENÉNDEZ HELMAN, RENATA; PÉREZ MARTÍNEZ, SILVINA; MIRANDA, PATRICIA

Mar del Plata

Congreso; 50 Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC).; 2005

SAIC

 RESUMEN: La NAG es la glicosidasa más activa en epidídimo y espermatozoides. Resultados previos de nuestro laboratorio apoyan su participación en la unión primaria a la zona pelucida y sugieren su localización en membrana y su relación con la maduración de los espermatozoides. En el presente trabajo quisimos verificar la presencia de NAG en la membrana plasmática del espermatozoide humano y su posible origen epididimario. Espermatozoides purificados por swim-up a partir de semen de donantes fueron utilizados para extracción con BWW, ensayos de unión de NAG o inmunocitoquímica. Enzima recombinante humana (hrNAG) fue biotinilada y utilizada para ensayos de unión a espermatozoides. La actividad enzimática se midió con un sustrato fluorométrico específico. Epididimos humanos se obtuvieron de pacientes sometidos a orquiectomía terapéutica por carcinoma de próstata. Citosol de tejido o fluído luminal del cauda obtenido por perfusión del vas deferens (CEP), fueron usados como fuente de enzima epididimaria. La inmunocitoquímica reveló la presencia de NAG en la membrana plasmática de la región acrosomal de espermatozoides no permeabilizados (negativos para el marcador intracelular SP-10). La NAG extraída de los espermatozoides fue activada por agregado de 0.1% TritonX100 (291±41% vs control=100, p<0.05). Esto no ocurrió con la NAG de otras fuentes (plasma sanguíneo: 96±1, hrNAG: 101±1, citosol de testículo: 103±2) pero si con la actividad proveniente del epidídimo (142±21 y142±2% para CEP y citosol respectivamente, p<0.05). Por último, los experimentos de unión de hrNAG sugirieron que la enzima puede unirse a los espermatozoides. Estos resultados apoyan la presencia de NAG en la membrana plasmática de los espermatozoides humanos, muestran una característica común entre la enzima epididimaria y la de espermatozoides y su habilidad para unirse a los mismos. En conjunto, los datos mostrados sugieren que la NAG podría incorporarse a los espermatozoides durante la maduración epididimaria.