Caracterización del eflujo de L-Arginina en células adrenales: efecto de ACTH

MARTINEZ CALEJMAN, C; REPETTO, E.M.; ASTORT, F.; BESIO MORENO, M.; PIGNATARO, O.; CYMERYNG, C.B.

Mar del Plata, Pcia. de Bs As, Argentina

Congreso; Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2005

Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC)

 En trabajos previos sugerimos que la actividad de óxido nítrico sintasa (NOS) en células adrenales puede ser regulada por el aporte de su sustrato L-arginina y demostramos un efecto estimulatorio de ACTH sobre el influjo de L-arginina y la producción de nitritos en la línea celular adrenocortical de ratón Y1. Asimismo identificamos los transportadores y+ (CAT 1 y CAT2) e y+LAT (CD-98 e y+LAT-2). El objetivo del presente trabajo fue caracterizar el mecanismo de eflujo de L-arginina en estas células. Los resultados obtenidos indicaron un eflujo significativo de L-arginina en ausencia de aminoácidos en el lado opuesto de la membrana que se incrementó por la presencia de L-Lys (2 mM) o L-Gln (2 mM) en el exterior celular (B: 83,8 ± 6,4; L-Lys: 167,1 ± 18,6; L-Gln: 185,3 ± 28,9 dpm/min/mg prot, p< 0.05 vs basal). La preincubación en presencia de NEM inhibió el eflujo en todos los casos. El reemplazo de Na+ por colina bloqueó el incremento en el eflujo de L-arginina trans estimulado por L-Gln (Na+: 185,3 ± 28,9; col: 101,6 ± 13.5 dpm/min/mg prot). El eflujo de L-arginina fue significativamente menor en presencia de ACTH (C: 71,37 ± 9,16 dpm/min/µg proteina vs A: 54,83 ± 16,7 dpm/min/µg proteina; p<0.05). El tratamiento con inhibidores de PKA, PKC y de PI3K bloqueó el efecto de ACTH sobre el eflujo de L-arginina.       Conclusiones La caracterización del eflujo de L-arginina en las células Y1 es consistente con la expresión y actividad de dos sistemas de transporte de L-arginina: el y+, dado el efecto inhibitorio del NEM en condiciones basales y el y+L, que es trans-estimulado por aminoácidos neutros en el exterior celular pero sólo en presencia de Na+. Este sistema podría proveer de L-arginina a células vecinas intercambiándola por aminoácidos neutros y Na+. De acuerdo a resultados previos que demostraban un efecto estimulatorio de ACTH sobre el uptake de L-arginina los resultados presentados sugieren que el efecto neto de ACTH es incrementar el influjo de L-arginina en las células Y1.