El gen de Hemooxigenasa-1 es reprimido por el factor de transcripción fundamental de células madre pluripotentes Oct4

VICTORIA PETRONE; AYELEN TORO; CAMILA VAZQUEZ ECHEGARAY; CLAUDIA SOLARI; SOLEDAD COSENTINO; MARCOS FRANCIA; ELBA VAZQUEZ; ALEJANDRA GUBERMAN

Chascomús

Taller; IV Taller de Biología Celular y del Desarrollo; 2018

Lascélulasmadreembrionarias (CME)soncapacesdediferenciarse,dandolugaracélulasdelas trescapasembrionarias,yademásposeenvariosmecanismosmolecularesqueaseguranlaestabilidaddelgenoma, evitando así la posible propagación de daño. La Hemooxigenasa-1 (HO-1) es la enzimalimitantedelcatabolismooxida=vodelgrupohemoy,enpar=cular,laisoformainducibleHO-1poseeac=vidad an=-apoptoó=ca y an=oxidante. Su acción se encuentra ampliamente estudiada en célulasmadre mul=potentes, sin embargo, poco se sabe acerca de su regulación en células madrepluripotentes (CMP).HemosencontradopreviamentequeHO-1esinducidaduranteladiferenciaciónde CME, mostrando un patrón de expresión opuesto al de los factores de transcripción (FT)fundamentalesparalapluripotencia,Nanog,Oct4ySox2.Enbaseaestaevidencia,nosproponemosestudiar si HO-1 es regulada por alguno de estos FT. En primer lugar analizamos in silico la regiónpromotora del gen HO-1 y encontramos varios si=os puta=vos de unión para Oct4 y Nanog. Luego,estudiamoslaregulacióndeHO-1enCMEenlasquedisminuimoslosnivelesdeexpresióndeestosFTmedianteelusodeshorthairpinRNA(shRNA).EncontramosquelosnivelesdeARNmensajero(ARNm)de HO-1, analizados mediante RT-qPCR, aumentaban en CME transfectadas con el shRNA dirigidocontra Oct4, respecto a los de las células transfectadas con el shRNA control (shGFP). Luego,estudiamossiHO-1estabamoduladaporOct4enunsistemaheterólogodondelaexpresióndedichoFT es inducida mediante tratamiento con doxiciclina (doxi). Demostramos que la inducción de Oct4disminuyó la expresión del gen de HO-1, tanto a nivel de ARN mensajero como de proteína,determinadoporRT-qPCR,inmunofluorescenciayWesternBlot.NuestrosresultadosdemuestranqueelFTOct4modulanega=vamentelatranscripcióndelgenHO-1,sugiriendounarelaciónentrelosFTdepluripotenciayelsistemadedefensafrentealestrésoxida=vo.