Extração de DNA a partir de embriões de Aylacostoma chloroticum (Caenogastropoda: Thiaridae)

VOGLER, R.E.; VERA, N.S.; HOFFMANN, Y.G.; PESO, J.G.; ARGÜELLES, C.F.

Foz de Iguazú. Paraná. Brasil

Congreso; 52º Congreso Brasilero de Genética. 12º Congreso de la Asociación Latinoamericana de Genética; 2006

Sociedad Brasilera de Genética. Asociación Latinoamericana de Genética

O gênero Aylacostoma é endêmico do rio Paraná (entre Paraguai e Argentina), e apresenta a família Thiaridae na Região Neotropical. Neste gênero encontram-se descritas quatro espécies: A. guaraniticum, A. cingulatum, A. stigmaticum e A. chloroticum ; as três primeiras foram extintas devido a inundação do seu habitat após da construção da represa Yacyretá (1993), e alguns poucos exemplares destas espécies são mantidos nos aquários do Museo Argentino de Ciencias Naturales Bernardino Rivadavia (MACN). A. chloroticum possui algumas populações naturais de baixa densidade e de distribuição restrita ao rio Paraná. O objetivo deste trabalho foi desenvolver uma técnica para extração de DNA empregando como fonte, embriões das fêmeas partenogenéticas de A. chloroticum nas primeiras etapas da sua gestação, devido à sua fácil manipulação. Os embriões foram desagregados em tubos de 1,5 ml, adicionando 0,5 ml de solução salina y guardados a -20 ºC até sua utilização. Após foram adicionados 500μl de TEC/SDS (Tris/HCl 10 mM, EDTA pH: 8 10 mM, NaCl 10 mM, SDS 10%) e 2μl de proteinase K (100 mg/ml). As amostras foram incubadas a 56 º C durante 2 horas com inversão dos tubos cada 15 minutos. A extração prosseguiu com a utilização de solventes orgânicos: uma vez com fenol y uma com clorofórmio:álcool isoamílico (24:1). Finalmente,o DNA precipitou-se com álcool isopropilico. O pellet foi resuspendido com água bidestilada. Os produtos da extração foram detectados por coloração com brometo de etídio em gel de agarose 1%, visualizados e fotografados sob luz ultra-violeta. O DNA extraído exibiu um alto peso molecular, resultando apropriado para ser utilizado em técnicas de digestão com enzimas de restrição, Southern Blotting, PCR e outras técnicas de biologia molecular.