Extracción de ADN y amplificación del gen 16S ARNr en la especie amenazada Aylacostoma chloroticum (Caenogastropoda: Thiaridae): Un primer paso hacia su filogeografía

VOGLER, R.E.; HOFFMANN, Y.G.; VERA, N.S.; PESO, J.G.; ARGÜELLES, C.F.

Ciudad de Buenos Aires

Congreso; II Congreso Nacional de Conservación de la Biodiversidad; 2006

Universidad Maimónides. Universidad de Buenos Aires. Temaikén. Fundación de historia Natural "Félix de Azara"

El género Aylacostoma comprende un grupo muy antiguo de caracoles presentes en la parte Sur del Continente Americano. En la Argentina, Aylacostoma es endémico del río Paraná y representa a la familia Thiaridae en la Región Neotropical. En este género se encuentran descriptas 4 especies, A. guaraniticum, A. cingulatum, A. stigmaticum y A. chloroticum. Las 3 primeras se encuentran extintas en la naturaleza debido a la desaparición de los rápidos o correderas que constituían su hábitat, a causa de la construcción de la represa Yacyretá, las cuales son mantenidas ex situ, en acuarios del Museo Argentino de Ciencias Naturales Bernardino Rivadavia. Aylacostoma chloroticum posee todavía algunas poblaciones naturales actualmente amenazadas de baja densidad y de distribución restricta. El primer objetivo de este trabajo fue desarrollar una técnica rápida para extracción de ADN utilizando branquias y embriones de las hembras partenogenéticas de A. chloroticum. Las muestras fueron disgregadas en tubos de 1,5 ml, adicionando 400 μl de Buffer de Homogenización Salina (NaCl 0,4 M, Tris/HCl 10 mM, EDTA 2 mM), 80 μl de SDS10% y 4.6 μl de proteinasa K (100mg/ml). Se prosiguió con una incubación a 60ºC. A continuación, se agregaron 300 μl de NaCl 6 M. Las muestras fueron agitadas con vortex a máxima velocidad y se centrifugaron a 10,5 rpm. El ADN fue precipitado con alcohol isopropilico y lavado con etanol 70%. Los botones fueron resuspendidos con TE. Los productos de extracción se detectaron por coloración con bromuro de etídio en gel de agarosa al 1%; fueron visualizados y fotografiados bajo luz UV. El ADN extraído exhibió alto peso molecular resultando apropiado para ser utilizado en técnicas de digestión con endonucleasas de restricción, Southern Blotting, PCR y otras técnicas de biología molecular. El segundo objetivo fue amplificar un fragmento del gen 16S ARNr presente en el ADN mitocondrial, utilizando cebadores interespecíficos. Se logró amplificar y visualizar un fragmento de 300 pb, el cual permitirá una vez conocida su secuencia, realizar comparaciones e inferencias filogeográficas entre las poblaciones de A. chloroticum.