Método simple y eficiente para la detección de ADN de protoescólices de Echinococcus granulosus

ROMINA PETRIGH; GIULIA MITTON; ANDREA CUMINO; MARTIN FUGASSA

Buenos Aires

Otro; XXV Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Protozoología y Enfermedades Parasitarias; 2012

Sociedad Argentina de Protozoología

Echinococcus granulosus infecta una variedad de mamíferos silvestres y domésticos. La forma adulta reside en carnívoros (hospedador definitivo), mientras que la larva (quiste hidatídico) se puede encontrar en una variedad de mamíferos (hospedador intermediario) tales como el hombre, resultando ser un serio problema para la salud pública. Existen varios genotipos descriptos de E. granulosus que determinan la tasa de fertilidad de los quistes en las distintas especies que actúan como hospedadores intermediarios. En mamíferos silvestres existen escasos estudios acerca de los genotipos presentes de este cestode. Es necesaria la aplicación de un método eficiente, simple y rápido para la obtención de secuencias para genotipificación. En tal sentido, el objetivo fue desarrollar un nuevo método de lisis enzimática seguida de PCR a partir de protoescólices (pts). Para su optimización se aplicó la lisis a 1000, 100, 50, 25 pts aislados a partir de quistes hidatídicos de bovinos. Para evaluar la cantidad mínima de muestra que se podía utilizar se lisaron 10 muestras conteniendo 1 pt. Para demostrar la eficiencia de la lisis se diseñó un par de oligonucleótidos para amplificar un fragmento de 125 pb del gen CO1. Se logró amplificar este fragmento en las distintas cantidades de protoescólices inclusive en todas las muestras que contenían 1 protoescólice, demostrando la capacidad de este método para la detección de mínimas cantidades de muestra. Los resultados moleculares fueron corroborados por la observación microscópica de los pellets provenientes de la lisis que mostraron signos de ruptura de los protoescólices. Este método de lisis enzimática y amplificación por PCR resultó ser específico y sensible, permitiendo obtener resultados de manera económica, simple y rápida. Además, podría ser aplicado en la genotipificación de E. granulosus a partir de mínimas cantidades de muestra aportando información sobre los genotipos circulantes en animales silvestres de nuestro país.