Screening de inhibidores de la ubiquitinación de pcna como inductores de letalidad sintética inéditos en células deficientes en recombinación homóloga

VILLAFAÑEZ, FLORENCIA; GARCÍA, ALEJANDRA I.; QUIROGA, RODRIGO; PANSA, MARÍA F.; CARBAJOSA, SOFÍA; MANSILLA, SABRINA; JACOBS, HEINZ; GOTTIFREDI, VANESA ; BOCCO, JOSÉ L. ; VILLAREAL, MARCOS; SORIA, GASTÓN

Congreso; II Congreso Científico Profesional de Bioquímica 2019; 2019

INTRODUCCIÓN:La Síntesis por Translesión (TLS) y la Recombinación Homóloga(HR) son procesos que cooperan durante la fase S para garantizar laintegridad de la horquilla de replicación. En consecuencia, lainhibición de TLS es una estrategia prometedora para la intervenciónterapéutica de tumores deficientes en HR dónde la inhibición deTLS promueva letalidad sintética (LS). La principal limitación paraevaluar esta hipótesis es la falta de inhibidores farmacológicosselectivos para TLS.OBJETIVOS:Nuestro trabajo busca generar plataformas y/o ensayos que permitanidentificar inhibidores de la mono-ubiquitinación de PCNA(ubi-PCNA), una modificación pos-traduccional clave y necesaria parala activación eficiente de TLS y, que a su vez, permitan realizarpruebas de conceptos de LS en células deficientes en HR. MÉTODOS: Desarrollamos dos plataformas descreening complementarias: 1- Western Blot miniaturizado con dosanticuerpos contra ubi-PCNA y PCNA total acoplado a un scanner conláser infrarrojo; 2- Screening virtual para identificar inhibidoresde ubi-PCNA mediante modelado molecular. RESULTADOS:Se identificaron potentes inhibidores de ubi-PCNA con ambasplataformas. Además, se realizaron pruebas de concepto quedemuestran que la inhibición de la ubiquitinación de PCNA induce LSen células deficientes en HR sometidas a irradiación UV y atratamiento con cisplatino. CONCLUSIONES:Los resultados obtenidos sientan las bases para el desarrollo de unnuevo enfoque terapéutico dónde la inhibición de TLS puede seralcanzada mediante la inhibición farmacológica de la ubiquitinaciónde PCNA.p { margin-bottom: 0.1in; direction: ltr; line-height: 120%; text-align: left; }a:link { color: rgb(5, 99, 193); }