Proteoma diferencial cuantitativo de Escherichia coli O157:H7 clado 8 y clado 6 aisladas de ganado bovino argentino comparado con EDL933

NATALIA AMIGO; ZHANG Q.; AMADIO ARIEL; WANDER MARQUES DA SILVA; CUI B.; CHEN Z.; LARZABAL MARIANO; BEI J.; ANGEL A. CATALDI

Congreso; Congreso Latinoamericano y argentino de microbiología 2016; 2016

Escherichia coli enterohemorrágica O157:H7 (EHEC) es causante de diarrea severa y síndrome urémico hemolítico (SUH), el cual afecta principalmente a menores de 5 años; siendo Argentina el país de mayor incidencia del mundo. El ganado bovino es su principal reservorio y fuente de infección. Sus mayores atributos de virulencia son la toxina Shiga y el Sistema de Secreción de tipo III, a través del cual la bacteria trasloca proteínas efectoras a las células intestinales. A partir del genotipado de Polimorfismos de Nucleótido Simple (SNPs), aislamientos de EHEC O157:H7 fueron agrupados en nueve clados distintos. Las cepas de clado 8 y clado 6 fueron más frecuentemente asociadas con enfermedad severa y SUH. Se ha observado una predominancia de cepas de clado 8 y clado 6 en el ganado de diferentes provincias de Argentina. En este trabajo, nuestro propósito fue identificar proteínas diferencialmente expresadas en dos cepas de EHEC O157:H7 con fenotipo de hipervirulencia, clado 8 y clado 6, aisladas de ganado bovino argentino; comparadas con la cepa estándar EHEC O157:H7 EDL933.Fueron preparados sobrenadantes de cultivo y extracto celular de las cepas clado 8 (Rafaela II), clado 6 (7.1 Anguil) y el control clado 3 (EDL933). Las proteínas fueron extraídas y analizadas utilizando cromatografía líquida de dos dimensiones y espectrometría de masas en tándem. Las muestras fueron individualmente marcadas con el método TMT6plex y analizadas mediante los software Mascot y Scaffold para determinar proteínas diferencialmente expresadas. Se identificaron 2328 proteínas en el extracto celular y 1696 en el sobrenadante. El análisis posterior se enfocó en proteínas sobreexpresadas, posiblemente relacionadas con la virulencia. Tanto para el clado 8 como para el clado 6 se identificaron familias de proteínas sobre expresadas relacionadas, así como también proteínas individuales. Se pudieron identificar proteínas de fagos, las subunidades de toxina Shiga, proteínas relacionadas a la quimiotaxis, la síntesis del flagelo, un componente del Curli, un activador transcripcional, una serin-protein-kinasa; un inhibidor de lisozima, la proteasa TagA, una enzima dienelactona hidrolasa, y la Hemolisina A (HlyA). Todas estas proteínas fueron de 4 a 16 veces más abundantes en clado 8 y clado 6 que en (clado 3) EDL933, aunque con diferentes niveles de sobreexpresión dependiendo del clado. Éstas fueron analizadas por PCR cuantitativa en tiempo real (RT-qPCR). Los resultados obtenidos corroboran los datos proteómicos para 10 genes sobre 13 ensayados. Estos resultados muestran proteínas hiperexpresadas, en especial aquellas asociadas a fagos característicos de E. coli O157:H7, en cepas de clado 8 y clado 6. Esto alerta sobre el rol epidemiológico del ganado como fuente de infecciones severas por Escherichia coli O157:H7 en humanos.Palabras claves: E. coli O157:H7, Clado 8, Clado 6, proteoma diferencial cuantitativo, factores de virulencia.